CRF elisa酶聯(lián)免疫試劑盒(間接法)步驟：

(1) 抗原包被：用包被液將PEDV抗原作1∶5稀釋包被反應(yīng)板，每孔100μl，同時(shí)設(shè)陰性細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)照孔，置4℃過(guò)夜。
(2) 洗滌：用洗滌液洗滌2次，每次2min，瀝干。
(3) 加入被檢血清：用保溫液將被檢血清作1∶100稀釋?zhuān)尤敕磻?yīng)板相鄰的兩個(gè)孔中，每孔100μl。同時(shí)作陰、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照，置37℃孵育1h。
(4) 洗滌3次：方法同上。
(5) 加入酶結(jié)合物：用保溫液將酶結(jié)合物作1∶4 000稀釋?zhuān)尤敕磻?yīng)孔中，每孔100μl，置37℃孵育1h。
(6) 洗滌3次：方法同上。
(7) 加入底物：每孔100μl，置室溫暗盒內(nèi)顯色20min。
(8) 加入終止液：每孔50μl，靜置5min。
(9) 測(cè)定OD值：用檢測(cè)儀，于492nm波長(zhǎng)，按儀器使用及制定標(biāo)準(zhǔn)要求調(diào)節(jié)儀器，測(cè)定各反應(yīng)孔的OD值，記錄結(jié)果。

試劑使用須知：
（1）請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進(jìn)行安全操作。
（2）通常購(gòu)買(mǎi)試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話(huà)，更加注意其他保管和管理。
（3）萬(wàn)一試劑操作者并非專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員。必須在專(zhuān)業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對(duì)于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
（4）購(gòu)買(mǎi)后，請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)；做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)，做好必要的安全對(duì)策；對(duì)沒(méi)有標(biāo)明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作；必須帶好防護(hù)用具，小心翼翼進(jìn)行操作。

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