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規(guī)格	100mL/500mL	貨號	EY-XP4462
貨期	現(xiàn)貨	用途	僅供科研實(shí)驗(yàn)

商品描述：

兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品名稱	兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基	規(guī)格	100mL/500mL
用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)	貨號	EY-XP4462

由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持兔原代肝成纖維細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含兔原代肝成纖維細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用兔原代肝成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

名稱	體積	濃度	保存條件
原代成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基	500mL	1×	4℃、避光
原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)添加劑	5mL	100×	-20℃、避光
胎牛血清（FBS）	25mL	終濃度5%	-20℃、避光
雙抗（青霉su/鏈霉su，P/S）	5mL	100×	-20℃、避光

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：按照對應(yīng)保存條件保存12個(gè)月，配置好的培養(yǎng)基2℃～8℃,保存2個(gè)月；

質(zhì)量控制

檢測項(xiàng)目		質(zhì)量控制
澄清度		澄清
PH		7.3±0.2
內(nèi)毒素含量 (EU/mL)		≤10
無菌檢測	細(xì)菌	陰性
	真菌	陰性
	支原體	陰性
細(xì)胞生長試驗(yàn)	細(xì)胞形態(tài)	正常
	細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)	合格

兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)：
兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基
僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

公司正在出售的產(chǎn)品：
兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠雜交瘤細(xì)胞；HEV-NICPBP58	大鼠原代胰腺星狀細(xì)胞專用培養(yǎng)基
小鼠雜交瘤細(xì)胞；HEV-NICPBP04	血管內(nèi)皮生長因子
小鼠雜交瘤細(xì)胞；3H5	組人白細(xì)胞介素-2（凍干粉GMP級）
小鼠雜交瘤細(xì)胞；4D11	重組小鼠白細(xì)胞介素-2
小鼠雜交瘤細(xì)胞；ZUF	白介素-3
小鼠雜交瘤細(xì)胞；BDRXN	組人胰島素
人胚胎干細(xì)胞；HES3.1	組人白細(xì)胞介素-4
人胚胎干細(xì)胞；Endeavour-1	組人白細(xì)胞介素-4
小鼠雜交瘤細(xì)胞；3G4	組人白介素-13
小鼠雜交瘤細(xì)胞；4D1	重組大鼠血管內(nèi)皮生長因子 VEGF 164
抗人大腸癌單抗雜交瘤細(xì)胞；CYL-2	人轉(zhuǎn)化生長因子B3
小鼠雜交瘤細(xì)胞；3C8	人轉(zhuǎn)化生長因子B2
小鼠雜交瘤細(xì)胞；7H11	人腫瘤壞死因子alpha
小鼠雜交瘤細(xì)胞；F7	兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基人骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體I型beta
小鼠雜交瘤細(xì)胞；2F2b	人干擾素γ（IFNγ）

操作要點(diǎn)：

兔原代肝成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。