zui近看大家常提到支原體污染，就翻了翻書(shū)，做了些筆記，現(xiàn)在貼出來(lái)和大家分享： 
支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(zui小直徑0．2um)并獨(dú)立生活的微生物．約有1%可通過(guò)濾菌器。支原體無(wú)細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。 
支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電鏡下觀察支原體膜為三層結(jié)構(gòu)．其有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且無(wú)顆粒群 
或束。 
  支原體代謝需固醇類物質(zhì)、部分種類需要、O 2或葡萄糖，每一種支原體都有自身持點(diǎn)。多數(shù)  支原體適合于偏堿條件下生存(PH7．6—8．0)，對(duì)酸耐受性差。對(duì)熱比較敏感，對(duì)一般抗生素不敏感。 
  支原體污染細(xì)胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢．甚至從培養(yǎng)器皿脫落。 
 為確定有無(wú)支原體污染可做如下檢酗： 
 ①相差顯微境檢測(cè)：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。 
 ②熒光染色法：熒光染色用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內(nèi)含有的DNA 著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細(xì)胞接種蓋玻片上，在細(xì)胞未長(zhǎng)滿前取出玻片，用不合酚紅的Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min．向細(xì)胞面滴加pH5．5磷酸緩沖液數(shù)滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜 表面的亮綠色小點(diǎn)。 
 ③電鏡檢查；用掃描電鏡方法簡(jiǎn)便快速．也可以利用透射電鏡。 
 ④DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜 

   支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求比細(xì)菌高。
   細(xì)胞培養(yǎng)（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染是個(gè)世界性問(wèn)題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá)，又不能通過(guò)可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，而且    它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小，不易引起注意。國(guó)內(nèi)外研究表明，95％以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無(wú)膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是zui常見(jiàn)的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的，國(guó)外調(diào)查證明，大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞，有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。
   支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。
    組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無(wú)菌；在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后，特別是重要的細(xì)胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體zui突出的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁，一般來(lái)講，對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素，如 -內(nèi)酰胺類、等*不敏感；對(duì)多粘菌素（polymycin）、、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些；其他類抗生素如氨基糖苷類、對(duì)支原體有較小抑制作用，所以常不用來(lái)作為支原體感染的化學(xué)治療劑。InvivoGen公司研究開(kāi)發(fā)的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體，不影響細(xì)胞本身的代謝，并且用M-Plasmocin處理過(guò)的培養(yǎng)細(xì)胞，不會(huì)重新感染支原體。