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?蛋白磷酸酶抑制劑混合液III型熒光定量PCR實驗步驟

時間：2022/3/1閱讀：768

①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。

②兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液濃度和純度。

轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體

內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體

細胞外基質(zhì)蛋白1抗體

外胚層發(fā)育不良抗體

E2 tag標簽抗體

鐵螯合酶抗體

DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體

上皮細胞粘附分子抗體

表皮生長因子抗體

表皮生長因子受體3抗體

上皮鈣粘附分子抗體

紅細胞生成素受體抗體

腦啡肽抗體

EID2蛋白抗體

上皮細胞粘附分子抗體

紅細胞膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體

腺樣癌特異性相關(guān)抗原抗體EMC1抗體

染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1抗體

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