細(xì)胞簡介：

大鼠食管平滑肌分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿過膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人脂蛋白a試劑盒   人脂蛋白a試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂蛋白a試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白a試劑盒、人脂蛋白a 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒、人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒   人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒、人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人整合素連接激酶1試劑盒   人整合素連接激酶1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人整合素連接激酶1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人整合素連接激酶1試劑盒、人整合素連接激酶1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豚鼠白介素8(IL-8)試劑盒 ，英文名： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)試劑盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β內(nèi)啡肽受體

細(xì)菌血液瓊脂平板50個

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒規(guī)格：96T/48T

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠食管平滑肌細(xì)胞人真胰島素(TI)ELISA 試劑盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)試劑盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH試劑盒人免疫反應(yīng)性生長激素(irGH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)

HumanleukocyteaigenA，HLA-AELISAKit人類白細(xì)胞抗原A(HLA-A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。