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定量 ELISA 技術(shù)的延伸和新的發(fā)展

時間:2019/3/13閱讀:874
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     在免疫學領(lǐng)域中,對于疾病以及疫苗研究不僅僅局限于體液免疫應答(B細胞免疫),細胞介導的免疫應答(cell mediated immune response,CMI)也是人們所關(guān)注的,而T細胞在CMI中起關(guān)鍵作用。在研究免疫應答機制時以往常用用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測體液中游離的細胞因子(CK)或抗體,但由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同,使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合,而不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。 80 年代,國外的科研工作者根據(jù) ELISA 技術(shù)的基本原理,建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和 CK 分泌細胞的固相酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)( ELISPOT )。作為一項新型的免疫酶技術(shù)——酶聯(lián)免疫斑點法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT),是從單細胞水平檢測分泌抗體細胞(ASC) 或分泌細胞因子(CK) 細胞的一項細胞免疫學檢測技術(shù)。由于該方法具有較高的特異性和敏感性,易操作,成本相對流式細胞分析術(shù)也較低,已被廣泛用于分泌CK細胞檢測或ASC測定中,對探索自身免疫系統(tǒng)疾病發(fā)病機制具有重要意義。

Elispot 法源自 ELISA,又突破傳統(tǒng) ELISA 法,是定量 ELISA 技術(shù)的延伸和新的發(fā)展。兩者都是檢測細胞產(chǎn)生的細胞因子或其他可溶性蛋白,它們zui大的不同在于:

() elisa通過顯色反應,在酶標儀上測定吸光度,與標準曲線比較得出可溶性蛋白總量。

(2) ELISPOT也是通過顯色反應,在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點,可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點或通過ELISPOT 分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù),個斑點代表個細胞,從而計算出分泌該蛋白的細胞的頻率。(某些研究不僅要測細胞因子生成量,還需檢測分泌此細胞因子的細胞頻率)

由于是單細胞水平檢測, ELISPOT 比 ELISA 和有限稀釋法等更靈敏,能從20萬-30萬細胞中檢出個分泌該蛋白的細胞。捕獲抗體為高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素單抗,在研究者以刺激劑激活細胞時,不會影響活化細胞分泌細胞因子。

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