ELISA技術(shù)測定儀器、原料和試劑
儀器
聚苯乙烯96孔酶標(biāo)板、微量移液管、酶聯(lián)免疫閱讀儀、水浴鍋。
原料
單克隆抗體
試劑
. 抗原及酶標(biāo)記抗體
①抗原：兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG，Code No.A0423);
②酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP，Code No.P0260);均為
DAKO 公司產(chǎn)品，使用時按照說明書要求稀釋。
4. 洗滌液(含0.05%Tween 20的PBS)：LPBS 中加入Tween-20 500μL。
5. 封閉液(含%牛血清白蛋白，0.%Tween 20的PBS)：0mLPBS 中加入00mgBSA，0μLTween-20。
6. 底物溶液
①緩沖液(0.mol/LpH6.0)：稱Na2HPO4·2H2O2.2g，NaH2PO4·2H2O 6.84g，用蒸餾水溶解，定容至500mL。
② TMB 貯液：稱60mgTMB 溶于0mL 二甲基亞砜中，4℃避光保存。
③底物應(yīng)用液：現(xiàn)用現(xiàn)配，磷酸鈉緩沖液0mL，TNB 貯液0μL。30%H2O2 5μL，混勻。
7. 終止液：2mol/LH2SO4
操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板
中。4℃放置過一夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h。
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另—塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照：2或：0)，00μL /孔加到已包被的板上，每個樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，00μL/孔，加蓋37℃恒溫箱溫育h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液00μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價。
儀器、原料和試劑
儀器
聚苯乙烯96孔酶標(biāo)板、微量移液管、酶聯(lián)免疫閱讀儀、水浴鍋。
原料
單克隆抗體
試劑
. 抗原及酶標(biāo)記抗體
①抗原：兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG，Code No.A0423);
②酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP，Code No.P0260);均為
DAKO 公司產(chǎn)品，使用時按照說明書要求稀釋。
4. 洗滌液(含0.05%Tween 20的PBS)：LPBS 中加入Tween-20 500μL。
5. 封閉液(含%牛血清白蛋白，0.%Tween 20的PBS)：0mLPBS 中加入00mgBSA，0μLTween-20。
6. 底物溶液
①緩沖液(0.mol/LpH6.0)：稱Na2HPO4·2H2O2.2g，NaH2PO4·2H2O 6.84g，用蒸餾水溶解，定容至500mL。
② TMB 貯液：稱60mgTMB 溶于0mL 二甲基亞砜中，4℃避光保存。
③底物應(yīng)用液：現(xiàn)用現(xiàn)配，磷酸鈉緩沖液0mL，TNB 貯液0μL。30%H2O2 5μL，混勻。
7. 終止液：2mol/LH2SO4
四、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板
中。4℃放置過一夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h。
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另—塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照：2或：0)，00μL /孔加到已包被的板上，每個樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，00μL/孔，加蓋37℃恒溫箱溫育h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液00μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價。
