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PCR產(chǎn)物純化之試劑盒回收操作流程

時(shí)間：2020/4/16閱讀：1546

. 取SunShinecleanTM DNA Mini Column 柱裝于2 ml 收集管上（已備）。加入500 μl Buffer B 平衡液至柱子內(nèi)，室溫下0,000 rpm 離心 min，使平衡液*流過(guò)柱子。棄去收集管中的平衡液，重新將DNA Mini Column柱裝于該收集管上。

2. 將需要純化的DNA（少于00 ul）置于干凈的.5 ml的EP管內(nèi)，加入300-500 ul Buffer K，充分混勻。

（注：一些PCR產(chǎn)物可能含有石蠟油，石蠟油可能會(huì)導(dǎo)致回收率降低。因此我們建議將石蠟油盡量清除。）

3. 將混合液轉(zhuǎn)移到一步已經(jīng)平衡的柱子里面，室溫放置2 min，0,000 rpm離心 min。

4. 棄去收集管中的濾液，將柱子裝回2 ml收集管內(nèi)，加入700 μl Buffer W（已用70%乙醇溶解的）至柱子中。室溫下0,000 rpm離心 min。

（注：濃縮的Buffer W在使用之前請(qǐng)用70%乙醇溶解。）

5. 重復(fù)步驟4一次。

6. 棄去收集管中的濾液，將柱子裝回2 ml收集管內(nèi)。室溫下，2,000 rpm離心2 min以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。

（注：省去這一步將導(dǎo)致殘留乙醇于DNA中。）

7. 把柱子裝在一個(gè)干凈的.5 ml離心管上，加入0-50 μl（具體取決于預(yù)期的終產(chǎn)物濃度）Buffer E（可用超純水或TE緩沖液代替）到柱基質(zhì)的膜，室溫放置0.5- min，2,000 rpm離心 min以洗脫DNA。di一次洗脫可以洗出80%以上的結(jié)合DNA。如果再洗脫一次的話，可以把殘余的DNA洗脫出來(lái)。

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