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膽汁酸(BA)競(jìng)爭(zhēng)法ELISA實(shí)驗(yàn)說明

2024-7-12  閱讀(435)

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檢測(cè)范圍:

0.1μmol/L -8μmol/L


使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定相關(guān)液體樣本中膽汁酸(BA)的含量。


實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中膽汁酸(BA)水平。用純化的膽汁酸(BA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入膽汁酸(BA),和HRP標(biāo)記的膽汁酸(BA)抗原,使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的膽汁酸(BA)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中膽汁酸(BA)的含量。 


標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本處理:(1)水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查

(2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,備查

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


操作步驟

1.加樣:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

2.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司是國(guó)內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基,抗體,動(dòng)物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品,化學(xué)試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),完善的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品。如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎來咨詢。

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