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關于酶點(ELISPOT)技術的相關知識

2009-11-16  閱讀(2956)

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      酶點(ELISPOT)技術是zui近幾年發(fā)展起來應用于抗病毒免疫和抗腫瘤免疫的一種新型測定方法。
     Sanquin 提供的顆粒酶-B酶點檢測試劑盒應用技術,靈敏度高,僅一個陽性細胞即可測到存在的顆粒酶-B。特異性強,結果重復性好。為抗病毒和抗腫瘤研究提供新型強有力的檢測工具。
酶點技術與酶標技術比較
1、酶點技術明顯的特點是靈敏度增加
2、酶點技術僅需要1 個陽性細胞 / 孔即可,靈敏度達到1 :1,000,000的陽性準確分析
3、酶標技術需要至少要有400 細胞 / 孔才可達到有意義的檢測水平
4、能在單細胞水平上分析產(chǎn)生細胞因子的T細胞
顆粒酶-B介紹
       顆粒酶是外切絲氨酸蛋白酶,來自細胞毒T淋巴細胞(CTLs)和自然殺傷細胞(NK)釋放的細胞漿顆粒。這些顆粒含有顆粒酶原及其它蛋白酶原,包括穿孔蛋白。由于CTL細胞與靶細胞結合(經(jīng)CTL受體和靶細胞表面的抗原肽-MHCⅠ類分子復合物結合),通過顆粒的胞吐過程,顆粒酶進入了靶細胞,穿孔蛋白在細胞膜聚合而進入靶細胞形成跨膜的小孔,使靶細胞膜穿孔。穿孔蛋白通過使粒酶-內體膜穿孔釋放出粒酶。顆粒酶B激活了細胞內caspases反應, zui后引起靶細胞的死亡.  顆粒酶A也能誘發(fā)靶細胞的凋亡。
       在許多疾病中,用流式細胞術和免疫細胞可測定顆粒酶B陽性的CTL百分比。 部分顆粒酶也可 “漏”入外周血液和其它體液。 在健康者體內也可測得顆粒酶。.這些可溶性的顆粒酶可以用ELISA測定。
       PeliSPOT人顆粒酶 B 試劑盒用于重復性 特異性定量測定人CTL細胞和NK細胞分泌釋放的顆粒酶B頻數(shù)。

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