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閱讀:859發(fā)布時(shí)間:2010-12-23
1.核素標(biāo)記物 放射性核素是目前應(yīng)用zui多的一類探針標(biāo)記物。放射性核素的靈敏度*,可以檢測(cè)到10-14~10-18克的物質(zhì),在zui適條件下可以測(cè)出樣品中少于1 000個(gè)分子的核酸含量。常用標(biāo)記核酸探針的核素有32P、3H、35S,在Southern印跡雜交中以“Pzui常用。還應(yīng)根據(jù)標(biāo)記方法的不同選擇相應(yīng)標(biāo)記方位的核素,一般情況下,大多數(shù)標(biāo)記方法需要的是a—32P,而5,末端標(biāo)記必須是r-32P。
2.非放射性標(biāo)記物 多年來(lái),科學(xué)家們致力于尋找一些安全、可靠、靈敏度高的物質(zhì)代替放射性核素用于核酸分子雜交,并取得了一定的進(jìn)展,部分非放射性標(biāo)記物已在國(guó)內(nèi)外逐步推廣使用。其優(yōu)點(diǎn)是無(wú)放射性污染,穩(wěn)定性好,可以較長(zhǎng)時(shí)間存放,從而更便于臨床診斷等方面的應(yīng)用。但此類非放射性標(biāo)記物的缺點(diǎn)是靈敏度及特異性都不太高。根據(jù)其檢測(cè)方法,非核素標(biāo)記物可分為以下4類。
(1)半抗原:*(biotin)和地高辛(DIG)都是半抗原,可以利用這些半抗原的抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè),根據(jù)顯色反應(yīng)檢測(cè)雜交信號(hào)。這兩種物質(zhì)是目前使用較普遍的非核素標(biāo)記物。
(2)配體:*不僅是半抗原,還是親和素(avidin)的配體,故可用*與親和素反應(yīng)進(jìn)行雜交信號(hào)的檢測(cè)。
(3)熒光素:如FITC、羅丹明類等,可以被紫外線激發(fā)出熒光進(jìn)行觀察,主要適用于細(xì)胞原位雜交。
(4)化學(xué)發(fā)光探針:一些標(biāo)記物可與某種物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象,通過(guò)化學(xué)發(fā)光可以像核素一樣直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光?;瘜W(xué)發(fā)光探針可能是今后非核素標(biāo)記物研究的主要方向。
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