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技術(shù)文章

免疫金細(xì)胞化學(xué)方法

閱讀：919發(fā)布時間：2010-12-29

Geoghegan等于1978年應(yīng)用免疫金探針檢測B淋巴細(xì)胞表面抗原建立了免疫金法（1GS）。IGS的特點是染色程序簡便，不需要顯色，既能檢測細(xì)胞表面的抗原，又能檢測細(xì)胞內(nèi)抗原。
下面以人肝組織HBsAg的定位檢測為例說明間接免疫金法的步驟。
（1）石蠟切片一脫蠟復(fù)水至PBS。
（2）0．1％*消化切片10rain或3mol／L尿素消化30rain。
（3）用蒸餾水振洗5minX2。
（4）用0．02mol／L TBS（pH8：2）振洗10rainX2。
（5）1％卵蛋白（EA）封閉10min。
（6）稀釋鼠抗HBsAg單克隆抗體[用0．02mol／1 TBS（pH8．2），作1：100稀釋]，4℃環(huán)境下過夜。
（7）0．02mol／L TBS（pH8．2）振洗10rainX2。
（8）1％EA封閉10min。
（9）0．02mol／L TBS（pH8．2）稀釋兔抗鼠金標(biāo)抗體（1：8）37℃45min。
（10）0．02mol／I TBS（pH8．2）振洗10rainX2。
（11）蒸餾水振洗5minX2。
（12）1％戊二醛，作用10min。
（13）蒸餾水浸泡5min。
（14）用蘇木素襯染核lmin，甘油封片。
結(jié)果：在光學(xué)顯微鏡下可見部分肝細(xì)胞漿內(nèi)有金顆粒聚集呈紅色，沿細(xì)胞膜分布，表明有HBsAg定位在細(xì)胞漿內(nèi)。
 


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