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技術(shù)文章

間接血凝反應(yīng)法ELlSA診斷日本血吸蟲病

閱讀:450發(fā)布時間:2011-2-23

該法是以紅細胞為載體的抗原—抗體凝集反應(yīng)。采用微孔型有機反應(yīng)板,用凍干血凝抗原、被檢血清以生理鹽水作1;10、1:20、1:40稀釋,每孔加被檢血清0.05ml,再加致敏紅細胞抗原液l滴振蕩,靜置40-60min后觀察結(jié)果。如紅細胞呈顆粒凝結(jié),不論是全部或部分均判為陽性。如紅細胞沉淀于孔底,也有新的發(fā)展。該法為血吸蟲免疫診斷的主要方法,與糞檢陽性符合率達95%一99%,假陽性為1.3%一3.3%,與其他寄生蟲的交叉反應(yīng)除肺吸蟲外均較低。常規(guī)ELISA方法在抗原抗體檢測中敏感性高,特異性強,但費時,成本高。為此,近年來改進的ELISA有如下幾種。

①快速—ELlSA。改進特點為用PVC薄膜代替聚苯乙烯微量反應(yīng)板作載體;將1%可溶性血吸蟲卵抗原與尿素溶解性血吸蟲卵抗原等量相混合預(yù)吸附于薄膜上。該法主要以目視法判斷結(jié)果,整個操作流程僅需20min左右。

②斑點—ELlSA(dot-ELISA)是近年新發(fā)展的一種ELISA技術(shù),選用對蛋白質(zhì)有很強吸附能力的硝酸纖維素薄膜作固相載體,底物經(jīng)酶促反應(yīng)后形成有色沉淀物使薄膜著色,然后目測或用光密度掃描儀定量。dot-ELISA可用來檢測抗體,也可用來檢測抗原,由于該法檢測抗原時操作較其他免疫學(xué)試驗簡便,故目前多用于抗原檢測。

③微波輻射ELISA(MWLELISA)。該法檢測全程僅需5min即可加底物顯色,判斷反應(yīng)結(jié)果。急性期和慢性感染陽性檢出率分別達到93%和64%以上(顧啟章等,1999)。

④全血快速ELISA。不用分離血清,檢測30nfin即可完成。

⑤磁珠—ELISA(MB-ELISA)。以磁珠作為固相載體,檢測日本血吸蟲的抗原。

⑥Cystatin—ELISA。應(yīng)用Cystatin捕獲血吸蟲吐出物中的半*蛋白酶,再進行ELISA試驗檢測日本血吸蟲病人血清中相應(yīng)的特異抗體(黃躍龍等,2002)。
 


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