十幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直從MT培養(yǎng)濾液中提純蛋白質(zhì)抗原，由于該方法制備蛋白抗原較煩瑣、費(fèi)時(shí)。因此，近年來(lái)，筆者研究室應(yīng)用基因工程技術(shù)克隆、表達(dá)MT基因，簡(jiǎn)便地獲得了大量MT單一的蛋白抗原（如CFPl0、ESAT6、MPT63、MPT64、Ag8、Ag85B、KatG、16ku、3Sku、65ku等蛋白），研究其診斷應(yīng)用價(jià)值。
（1）血清學(xué)診斷 20世紀(jì)70年代應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)患者血清中結(jié)核特異性抗體，成為結(jié)核病常用的輔助診斷手段之一，尤其是近十幾年來(lái)金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)已成為無(wú)需特殊儀器的快速診斷技術(shù)。由于結(jié)核患者免疫功能不同而導(dǎo)致對(duì)MT抗原識(shí)別的差異，此外結(jié)核患者對(duì)抗原的識(shí)別存在階段特異性，目前任何一個(gè)單一的抗原或商品化的組合抗原檢測(cè)試劑盒都無(wú)法檢測(cè)出所有結(jié)核患者血清中的抗結(jié)核抗體，結(jié)核病患者的抗體反應(yīng)是針對(duì)許多MT抗原的。因此，篩選多個(gè)純化的結(jié)核病的特異性抗原組成聯(lián)合抗原是目前血清學(xué)診斷的研究方向。
（2）皮膚試驗(yàn) 結(jié)核菌素、純蛋白衍生物（PPD）皮膚試驗(yàn)是zui常用且zui簡(jiǎn)便的一種結(jié)核分枝桿菌感染診斷方法，但由于PPD中含有許多分枝桿菌共同的抗原，PPD皮試陽(yáng)性并不能鑒別是因?yàn)镸T復(fù)合群感染還是接觸環(huán)境中NTM或卡介苗接種后造成的致敏。因此，PPD皮試診斷的特異度差，用該方法進(jìn)行結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查獲得的結(jié)核分枝桿菌感染率并不能真正反映人群中結(jié)核分枝桿菌感染的實(shí)際狀況。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)動(dòng)物模型或臨床試驗(yàn)研究純化抗原、合成多肽和重組蛋白，篩選致病性結(jié)核分枝桿菌表達(dá)而B(niǎo)CG不澩锏摹⒂盞計(jì)し舫俜⑿捅涮從?DTH）的特異抗原，以期建立新的結(jié)核皮膚診斷試劑。
（3）雙抗體夾心ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子水平 目前的研究已表明活動(dòng)性肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎或腦膜炎患者血液中或局部組織的T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞在MT抗原的激活下，釋放可溶性白細(xì)胞介素（1L-2）受體、膜IL-2受體、γ干擾素（1FN-γ）、。腫瘤壞死因子、IL-18和IL-8的水平不同，與正常人或非結(jié)核性疾病差異有顯著性。因此，采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)其在血清、胸腔積液、腦積液中的水平，對(duì)結(jié)核病具有輔助診斷和鑒別診斷價(jià)值；對(duì)抗結(jié)核療效和病情轉(zhuǎn)歸的評(píng)價(jià)具有一定的臨床意義。
（4）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) MT特異的蛋白抗原（如ESAT6、CFPl0蛋白等）可刺激結(jié)核分枝桿菌感染的人和牛外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）產(chǎn)生增殖反應(yīng)和大量的IFN-γ，而卡介苗接種的健康人對(duì)該抗原反應(yīng)水平低，其特異性顯著高于MT超聲抗原和培養(yǎng)濾液。結(jié)核病在疾病發(fā)展的不同階段，T淋巴細(xì)胞識(shí)別的結(jié)核抗原也不盡相同，因此，目前正通過(guò)雙抗體夾心ELISA檢測(cè)PBMC受特異抗原刺激后產(chǎn)生IFN-了的水平，或通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）檢測(cè)分泌IFN-丁的外周血T淋巴細(xì)胞，建立新的靈敏度高、特異度強(qiáng)的診斷結(jié)核分枝桿菌感染的特異性方法。但這些方法均為體外的T細(xì)胞試驗(yàn)，技術(shù)較復(fù)雜，需要高度純化的MT特異的蛋白或多肽抗原及用于細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞因子檢測(cè)的儀器、設(shè)備，可能難以在臨床上常規(guī)應(yīng)用。
（5）T細(xì)胞亞群分析 結(jié)核病患者存在明顯的細(xì)胞免疫功能紊亂，其外周血CD+3、CD+4T淋巴細(xì)胞下降，CD+8T淋巴細(xì)胞增高，CD+4／CD+8值降低，同時(shí)伴有T細(xì)胞活化功能障礙，尤其是活動(dòng)性結(jié)核病更為顯著；但結(jié)核性胸腔積液中淋巴細(xì)胞比例、CD+4T淋巴細(xì)胞顯著升高。分析T細(xì)胞亞群的變化對(duì)于病情監(jiān)控、療效判定和預(yù)后判斷都具有重要意義，并有助于結(jié)核性和癌性胸腔積液的鑒別。
（6）紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定 紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)新概念是1981年由美國(guó)學(xué)者Siegel提出的，經(jīng)過(guò)20多年國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞CRl有黏附C3b、C4b的能力。測(cè)定結(jié)核病患者紅細(xì)胞免疫黏附能力和紅細(xì)胞免疫黏附促進(jìn)因子，結(jié)果兩者均明顯低于正常人，結(jié)核病患者紅細(xì)胞免疫促進(jìn)因子下降可能是其紅細(xì)胞免疫黏附功能降低的重要原因之一。因此，紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定可作為結(jié)核患者免疫功能狀態(tài)的一個(gè)新指標(biāo)，為結(jié)核患者的*、判斷愈后提供依據(jù)。
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