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技術(shù)文章

抗乙酰*受體抗體自身抗原

閱讀:825發(fā)布時(shí)間:2011-12-17

1.定義 乙酰*受體(AChR)是一種膜離子通道的低聚物。乙酰*由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末梢釋放結(jié)合至AChR兩個(gè)。亞單位上,使*通道打開,允許陽離子順化學(xué)梯度彌散至肌肉,產(chǎn)生終板電位,在MG患者中抗乙酰*受體的抗體使終板的乙酰*受體數(shù)減少,但由于終板電位通常較閾電位要高,AChR中度減少不會(huì)引起臨床癥狀。終板電位高于閾電位的程度隨種類明顯不同,并在不同個(gè)體肌肉內(nèi)也相差很大,可能導(dǎo)致重癥肌無力(MG)的不同臨床表現(xiàn)。神經(jīng)肌肉遞質(zhì)的傳遞的解剖學(xué)及生理學(xué)在此不詳細(xì)的討論。
2.結(jié)構(gòu)及來源 AChR有五個(gè)亞單位α2,β,δ,ε構(gòu)成一個(gè)*孔道。正常成人肌肉AChR局限在終板的突觸后膜;正常健康成人的肌肉提純AChR,只有0.3 pm01/g的得率。在胎兒肌肉或原代培養(yǎng)的肌細(xì)胞中AChR可在整個(gè)成肌細(xì)胞及肌管內(nèi)檢測(cè)到。隨著肌纖維發(fā)育成熟、肌細(xì)胞受神經(jīng)支配,AchR逐漸局限于終板區(qū)域,隨后γ亞單位被ε取代。在人類,胎兒型AchR在妊娠33周時(shí)被成人型取代,而嚙齒動(dòng)物這種轉(zhuǎn)變是在出生后進(jìn)行。如果去神經(jīng)支配發(fā)生在成熟后,則雖然終板處乙酰*受體密度仍很高,但丁亞單位會(huì)再次出現(xiàn)在肌纖維的表面。因此,胎兒及去神經(jīng)支配的肌肉可用于純化AChR。
胸腺髓質(zhì)中含有類肌細(xì)胞,名為“myoid”。myoid能表達(dá)胎兒型AchR,在胎兒及新生兒胸腺中zui常見,但也可在成人的胸腺中找到。它們?cè)谥匕Y肌無力病因?qū)W上的作用尚未闡明。
人類肌細(xì)胞AChR可從手術(shù)后標(biāo)本中獲得,天然肌細(xì)胞膜部分可用相同容量的2%TritonXl00抽提獲得,在抽提物中需加入苯甲基雙乙磺丙烷氟化物和其他蛋白水解酶抑制劑,4℃時(shí)可保存1~2周,在一70℃時(shí)可保存幾個(gè)月。
3.純化 AchR對(duì)a-BuTx的高親和力和特異性確保了檢測(cè)的特異性和敏感性,因此不需要做抗原純化。抽提時(shí)用2—3nM125I-α-BuTx (比活必須在3000/mrn01)作親和劑。要注意的是,如果用僅表達(dá)刪L型AchR的細(xì)胞作為原料,成人型AChR特異性自身抗體容易漏檢,可能導(dǎo)致陰性結(jié)果增加7%。
4.序列特性 AChR的基因首先是從一些魚類的發(fā)電器官中克隆出來并測(cè)得序列,目前已經(jīng)克隆出許多物種包括人類的AChRcDNA。個(gè)體間的亞單位有顯著的相似性,且不同物種間也有較多的同源性。然而,抗原表位卻有顯著差異,因而用人類或靈長類的乙酰*受體作為抗原來作免疫測(cè)定診斷*。


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