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技術(shù)文章

組織切片的免疫酶標(biāo)抗體染色法

閱讀：266發(fā)布時(shí)間：2012-2-16

1)4％多聚甲醛固定的組織置15％～20％蔗糖PBS中漂洗，4℃過夜或組織塊下沉至 杯底；
2)制作30～40um厚的振動(dòng)切片或冰凍切片，PBS漂洗；
3)2％H2O2甲醇處理，室溫20分鐘，封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性；
4)1％BSA室溫孵育15分鐘；
5)*抗體4℃孵育12～24小時(shí)，PBS漂洗；
6)HRP或*標(biāo)記的第二抗體室溫孵育30—60分鐘，如系*標(biāo)記的第二抗體，反應(yīng)后則需進(jìn)一步按ABC法要求操作；
7)呈色反應(yīng)：0．03％～0．05％DAB 0．01％H2O2/0．05m01／L Tris—HCl(pH 7．6)顯色，適時(shí)終止反應(yīng)，PBS漂洗；
8)1％戊二醛0．1mol／L PB配制固定15～30分鐘(4℃)，P13S充分漂洗；
9)樣品的鋨酸后固定、脫水、包埋、超薄切片制作及電鏡觀察等處理與常規(guī)電鏡相同。

組織切片的免疫酶標(biāo)抗體染色法電鏡圖
環(huán)氧樹脂包埋前免疫酶染色示大鼠脊髓背角淺層內(nèi)P物質(zhì)在轱突終夫中的分布，箭頭示高電子密度的免疫反應(yīng)產(chǎn)物(A1，標(biāo)記的軸突終末；A2，未標(biāo)記的軸突終末；D，樹突


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