液相色譜儀的分離是在色譜分離柱中實(shí)現(xiàn)的。我們目前工作中多采用反相色譜柱，如何保護(hù)好分離柱減少柱的污染是延長(zhǎng)柱壽命的關(guān)鍵。
1維護(hù)好色譜分離柱的方法
加保護(hù)柱（預(yù)柱）是保護(hù)分離柱的有效辦法。保護(hù)柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護(hù)柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學(xué)垃圾，這些垃圾如果直接進(jìn)入分離柱會(huì)逐漸堆積在柱頭，zui終降低柱效能。
避免高壓沖擊分離柱。一般色譜柱都能承受得起高壓，但經(jīng)不住突然變化的高壓沖擊，這將改變柱床體積，影響柱效。
合理選擇分離柱。我們知道，選擇色譜分離柱主要根據(jù)兩點(diǎn)，一是根據(jù)待測(cè)組分的分子量的大??；二是根據(jù)流動(dòng)相條件，包括PH值、離子強(qiáng)度和溶劑極性等。
定期沖洗分離柱。每次分析工作結(jié)束時(shí)，沖洗完緩沖鹽后，zui后要過度到用強(qiáng)溶劑沖洗柱子，如可用色譜純甲醇、乙腈沖洗反相C18柱，目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇/水為流動(dòng)相也應(yīng)這樣沖洗柱子，在一定程度上可恢復(fù)柱效。
2減少柱的污染的方法
zui有效的辦法是純化樣品。我們?cè)诙嗄甑姆治龉ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)，凡是樣品純化的越干凈，分離柱的壽命就越長(zhǎng)；反之，只有提取沒有純化的樣品，分離柱柱效下降較快。建立一個(gè)理想的色譜分析方法應(yīng)該有一套有效的樣品前處理方法，特別是在分析血漿和尿液樣品時(shí)，要特別注意樣品的提取與純化，盡量使處理過的樣品中雜質(zhì)降到zui低，保護(hù)柱頭和柱子。
提取純化好的樣品用流動(dòng)相來溶解，一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾，另一方面也是檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性，如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀，會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭，甚至樣品分解，出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件，如更換樣品溶劑，或改進(jìn)處理樣品的方法，或過濾，去除不溶性物質(zhì)。
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