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技術(shù)文章

液相色譜儀色譜柱的再生用溶劑及其順序

閱讀：15發(fā)布時間：2022-9-19

  除非特殊說明，在所有情況下，所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40~60倍。應(yīng)在清洗過程開始和結(jié)束時各測一次柱效和容量因子等色譜參數(shù)，比較液相色譜儀色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。確保色譜柱中沒有樣品盒緩沖溶液，清洗前所用的溶劑應(yīng)與zui初清洗時所用的溶劑相溶。應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測試時所用的流動相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。

  zui常見色譜柱再生用溶劑及其順序見下表：

 

填料類型

                                               再生用溶劑及其順序

正相填料

用四氫呋喃沖洗；用甲醇沖洗；用四氫呋喃沖洗；二氯甲烷沖洗；用無本正己烷沖洗

反相填料

用HPLV級水沖洗，沖洗時進(jìn)4等份的200µL二甲亞砜；用甲醇沖洗；用氯仿沖洗；用甲醇沖洗；

陰離子交換填料

用HPLC級水沖洗；用甲醇沖洗；用氯仿沖洗

陽離子交換填料

用HPLC級水沖洗；在沖洗的過程中進(jìn)4等份的200µL的DMSO；四氫呋喃清洗

蛋白質(zhì)凝膠過濾填料

去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染有兩種清洗/再生的方法：1弱保留蛋白質(zhì)，用30mol/L pH3.0磷酸鹽緩沖液沖洗；2強(qiáng)保留蛋白質(zhì)，用99%的水到99%的乙腈梯度洗脫60min


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