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技術(shù)文章

液相色譜建立梯度洗脫的方法

閱讀：88發(fā)布時間：2022-9-23

液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下：

1 選擇基本色譜條件：

色譜柱：15mm×4.6mm或25mm×4.6mm，C8或C18反相填料，5μm粒度。

流動相：水-乙腈（5~99%）B可變。

梯度時間為：25min（2mL/min）到50min（1mL/min）。

2 調(diào)整梯度范圍

盡可能減少分離開始和結(jié)束時的時間浪費（沒有色譜峰只走基線。

3 調(diào)整分離度

如果色譜圖有很多峰分離度不好，可以延長tG，要延長天G可以增加柱長，減小填料的顆粒度，降低流動相速度。調(diào)節(jié)tG、流動相速度和柱尺寸來保持平均容量因子值。

4 調(diào)節(jié)峰容量

調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰，改變流速以便使峰與峰的距離合適

5 如果要進一步改變峰間距，就改變有機溶劑的成分。

6 如果樣品的相對分子質(zhì)量大于500，就按S比例增加tG。S 可按下面數(shù)據(jù)進行估計：

樣品相對分子質(zhì)量

S

樣品相對分子質(zhì)量

S

100

1000

4

10

10000

100000

30

100



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