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南京科捷分析儀器有限公司
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閱讀:10發(fā)布時間:2022-9-27
一旦完成了液相色譜儀檢測方法建立,應對其進行論證,進行全面論證通常需通過簡略核查方法的專屬性、線性、準確性、精密度、回收率、靈敏度等而實施。在zui終論證方法之前,應準備和檢查書面分析方案,使之清晰、嚴密。實際的論證程序按方法的重要性不同,需時為1天一2周不等。理想的情況是,通過方證能找出可能因儀器和操作者的不同而導致的潛在問題。
在日常HPLC分析中,柱間重現(xiàn)性可能是主要問題之一。同種方法在不同批號的色譜柱上可能有不同的結(jié)果,任何意外的結(jié)果都應進行研究,以找出其原因,避免在日后的工作中出現(xiàn)同類錯誤。
完善方法
1. 應預備數(shù)據(jù)表明所需方法的性能;
2. 應有為其它操作者使用的書面分析步驟;
3. 以一個以上的系統(tǒng)或操作者,用包括期望組分和期望被測物濃度的樣品 系統(tǒng)地論證方法的性能;比較不同時間和不同實驗室之間的實驗數(shù)據(jù);
4. 應得到色譜柱的期望壽命以及柱間重現(xiàn)性的數(shù)據(jù);
5. 研究不正常的結(jié)果,以糾正潛在的問題;
6. 研究所有影響分離的條件(溫度、流動相組成、pH等);
規(guī)定這些條件的限度;對可能發(fā)生的問題(關(guān)鍵譜峰對分離不足;隨運行時間延長,zui末譜峰保留值增加等)提出建議措施。
這些條件的要求適用于滿足精密準確、穩(wěn)定可靠并可移植轉(zhuǎn)讓的嚴格HPLC標準方法。在其它情況下,可能只要求一次成功的分離或能快速、“粗略"地答復某一特定問題,此時可部分許多建議,僅明白并知道一個方法建立方案的真實目標就足夠了。
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