經常有客戶問到，
液相色譜儀進空白的時候出現(xiàn)鬼峰，是什么原因造成的呢?本文就造成液相色譜儀的原因展開討論。
首先，我們要了解等度和梯度的現(xiàn)象不一樣，所以下面的討論要分兩個部分進行展開。
一、等度色譜
首先讓我們定義一下問題中的空白，如果你進的是流動相，那么就不應該有峰，但是如果是其他的，例如你通常溶解樣品的溶液，那么有峰出現(xiàn)是正常的。除流動相外的任何溶液都會干擾流動相和固定相之間的平衡，從而導致峰出現(xiàn)。
回收流動相
如果流動相中的組分有輕微保留，就會表現(xiàn)為保留峰，這些峰可能是正峰或倒峰。如果你回收了流動相并且使用了一段時間，你就會發(fā)現(xiàn)在你平常進樣時樣品峰的位置會有一個倒峰。前面進的樣品聚集在回收溶劑里，固定相表面也部分覆蓋著分析物。當你進新鮮配置的流動相或者其他的溶劑時，樣品組分就會濃度不足(相對于含樣品的溶液來說)，這個濃度不足沿柱子流動，速度與其相應的峰一樣，這樣與通常色譜相反的圖譜就出現(xiàn)了。這個現(xiàn)象叫做空穴色譜，這些峰叫做空穴峰。這是不回收流動相的其中一個原因。
過載和沉淀
液相色譜儀如果進的樣是和流動相一樣，就要跳出柱子和流動相之外看看。例如可能是上一次過載引起的?？纯醋詣舆M樣器的洗針能否工作，手動的話確認注射器是否*清洗干凈，針筒外面也要洗。
會不會是前面的樣品組分沉淀或吸附在進樣器上?如果是這樣，那么每次進樣后這個峰就會減小。確保樣品所有組分都能溶于流動相，的解決辦法是用流動相溶解樣品。
流路產生
液相色譜儀每一次進樣都伴隨著一次壓力脈動。如果在流路中有死角，例如壓力儀的T型接頭等，壓力脈動會把死角的溶液帶到流路中來，呈現(xiàn)為一個峰。通常這種峰比色譜圖中的峰要寬。檢查一下流路，盡量不留死角。
二、梯度色譜
上面的原因適用與等度色譜，如果你是運行梯度，會有一些其他原因導致空白溶液中出峰。
溶液雜質
液相色譜儀流動相中的微小成分和雜質會在柱子的初始比例平衡過程中富集在柱子上，當梯度中流動相洗脫能力變大時，這些東西會象樣品一樣從柱子上脫離。如果你的流動相有很多雜質，出來的圖譜就會有很多的峰。問題的主要來源是水。水有很多途徑帶來雜質，包括凈化系統(tǒng)本身，存儲容器和細菌生長等等。水凈化系統(tǒng)要經常用反相梯度的空白基線來監(jiān)視。另外，推薦購買HPLC級的水。
即使使用高質量的溶液和溶劑，還是可能會檢測到由溶劑本身導致的峰。這取決于你用的檢測器，如果你用的是紫外檢測器，就取決于檢測波長以及檢測器對流動相折射率改變的敏感性。使用高質量的溶劑，梯度背景更象一個圓包而不是一堆峰。
含蛋白質的樣品
如果用反相色譜分析含蛋白質的樣品，也有可能在空白中發(fā)現(xiàn)峰，它是由之前的進樣帶來的。峰面積會在接下來的空白梯度中迅速減小。除非沒有進樣，否則這種現(xiàn)象表明樣品在進樣器中過載了。進樣器甚至可能會被弄掉線。這是由于有些蛋白質在開始的梯度中不*溶解造成的。例如在特定條件下只有2/3的卵蛋白素溶解在開始的梯度中，在接下來的每一次梯度中都有大概相同數(shù)量的卵蛋白素溶解到流動相中，經過幾次運行之后卵蛋白素的含量就變的微乎其微了，這種現(xiàn)象就是很典型的由蛋白質造成的。在我的印象中，還沒有發(fā)現(xiàn)過小分子化合物有這種現(xiàn)象。
綜上所述，發(fā)現(xiàn)問題后要善于總結原因，找到原因后對癥下藥，才能快速準確解決問題。
