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上海酶聯(lián)生物研究所


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經(jīng)營(yíng)模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:4010條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:采購(gòu)部 (經(jīng)理)

技術(shù)文章

現(xiàn)貨細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA 檢測(cè)試劑盒

閱讀:184發(fā)布時(shí)間:2012-8-6

 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA 檢測(cè)試劑盒            

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿
 

試驗(yàn)原理:
   ECM-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知ECM-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將ECM-1和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ECM-1的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料:

蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

樣品收集、處理及保存方法:

血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作注意事項(xiàng):

試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。


安全性:

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。

試劑盒性能:

1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作步驟:

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA 檢測(cè)試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析:

1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的ECM-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的ECM-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
3、檢測(cè)值范圍:0-80ng/ml
4、敏感度: 0.1 ng/ml

4-Fluorotoluene 對(duì)氟甲苯 [352-32-9] 250ml
5-Fluorouracil 5-氟* [51-21-8] 5g
5-Fluorouracil 5-氟* [51-21-8] 1g
Fluridone 氟啶酮 [59756-60-4] 100mg
Foam-free powder 消泡劑 / 25g
Foam-free powder 消泡劑 / 100g
Foam-free powder 有機(jī)硅消泡劑 / 1kg
Folic acid * [59-30-3] 25g
Folic acid * [59-30-3] 100g
Glass wool 玻璃纖維 / 250g
Glipizide * [29094-61-9] 25g
Glipizide * [29094-61-9] 100g
Folin-Ciocalteu’s phenol reagent 福林酚 / 100ml
Forchlorfenuron 氯吡苯脲 [68157-60-8] 5g
Forchlorfenuron 氯吡苯脲 [68157-60-8] 25g
Formaldehyde(37-40%) solution * [50-00-0] 500ml
Formaldehyde 10% solution 10%* [50-00-0] 1L
Formaldehyde sodium sulfoxylate 甲醛合次硫酸氫鈉 [6035-47-8] 500g
Formamide 甲酰胺 / 500ml
Formamide 甲酰胺 / 100ml
Formamide 甲酰胺 / 500ml
Formamide deionized 去離子甲酰胺 [75-12-7] 100ml
Formamide deionized 去離子甲酰胺 [75-12-7] 500ml
Formamide deionized 去離子甲酰胺 [75-12-7] 50ml
Formamide deionized 去離子甲酰胺 [75-12-7] 250ml
Formamide 甲酰胺 [75-12-7] 250ml
Formic acid 98% 甲酸98% [64-18-6] 250ml
N-Formylmorpholine N-甲酰嗎啉 [4394-85-8] 100ml
Freund’s adjuvant, incomplete 弗氏不*佐劑 / 10ml
D-Fructose D-果糖 [57-48-7] 500g
D-Fructose D-果糖 [57-48-7] 2.5kg
D-Fructose D-果糖 [57-48-7] 500g
D-Fructose D-果糖 [57-48-7] 2.5kg
Fructose 1,6-bisphosphate, trisodium salt 1,6-二磷酸果糖三鈉鹽 [81028-91-3] 25g
Fructose 1,6-bisphosphate, trisodium salt 1,6-二磷酸果糖三鈉鹽 [81028-91-3] 100g
Fumagillin from Aspergillus fumigatus 煙曲霉素 [23110-15-8] 10mg
Fumaric acid 反丁烯二酸 / 500g
Fumonisin B2 伏馬菌素 B2 [116355-84-1] 5mg
Furfural 糠醛 [98-01-1] 250ml
G 418 sulfate, 40mg/ml solution, sterile 溶液 [108321-42-2] 5ml


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