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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：309發(fā)布時間：2013-12-31
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：尿液
試驗原理：
KIM-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（ELISA）.人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒已知KIM-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將KIM-1和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中KIM-1的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實(shí)驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
1． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的KIM-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的KIM-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml
防御素β1(DEFβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Defensin Beta 1 (DEFb1) 48T/96T Y11131 Homo sapiens (Human)
三葉因子3(TFF3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Trefoil Factor 3, Intestinal (TFF3) 48T/96T Y11132 Mus musculus (Mouse)
低密度脂蛋白(LDL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Low Density Lipoprotein (LDL) 48T/96T Y11133 Mus musculus (Mouse)
高密度脂蛋白(HDL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for High Density Lipoprotein (HDL) 48T/96T Y11134 Mus musculus (Mouse)
鈣蛋白酶1(CAPN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Calpain 1, Large Subunit (CAPN1) 48T/96T Y11135 Mus musculus (Mouse)
花生四烯酸-5-脂加氧酶(ALOX5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Arachidonate-5-Lipoxygenase (ALOX5) 48T/96T Y11136 Rattus norvegicus (Rat)
ⅡD組磷脂酶A2(PLA2G2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phospholipase A2, Group IID (PLA2G2D) 48T/96T Y11137 Mus musculus (Mouse)
胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Phospholipase A2, Cytosolic (cPLA2) 48T/96T Y11138 Mus musculus (Mouse)
血幼素(HJV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Hemojuvelin (HJV) 48T/96T Y11139 Homo sapiens (Human)
轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Transthyretin (TTR) 48T/96T Y11140 Rattus norvegicus (Rat)
白蛋白(ALB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Albumin (ALB) 48T/96T Y11141 Rattus norvegicus (Rat)
組蛋白H3(H3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Histone H3 (H3) 48T/96T Y11142 Mus musculus (Mouse)
多配體蛋白聚糖1(SDC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Syndecan 1 (SDC1) 48T/96T Y11143 Homo sapiens (Human)
載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Apolipoprotein A4 (APOA4) 48T/96T Y11144 Sus scrofa; Porcine (Pig)
載脂蛋白D(APOD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Apolipoprotein D (APOD) 48T/96T Y11145 Homo sapiens (Human)
補(bǔ)體成分5(C5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA 人腎損傷分子 ELISA 檢測試劑盒Kit for Complement Component 5 (C5) 48T/96T Y11146 Homo sapiens (Human)
血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶1(ADAMTS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 1 (ADAMTS1) 48T/96T Y11147 Homo sapiens (Human)
補(bǔ)體成分8γ(C8γ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Complement Component 8g (C8g) 48T/96T Y11148 Homo sapiens (Human)
血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶7(ADAMTS7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ELISA Kit for A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 7 (ADAMTS7) 48T/96T Y11149 Homo sapiens (Human)
商鋪：http://www.kytsldc.cn/st32881/
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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