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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：1428發(fā)布時間：2011-3-10
禽流感實驗室檢測技術(shù)方案
一、實驗室網(wǎng)絡(luò)設(shè)置
實驗室網(wǎng)絡(luò)由中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國家流感中心和省級流感實驗室兩級組成。
二、實驗室條件及生物安全操作的要求
1．省級流感實驗室實驗條件及生物安全的操作要求
（1）實驗生物安全要求：安全Ⅱ級+（BSL-2 級+）或安全Ⅲ級（BSL-3 級）。
（2）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測、血清學(xué)檢測中用到的血凝抑制實驗（HI）可以在安全Ⅱ級+（BSL-2 級+）實驗室里操作。
（3）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測在安全Ⅱ級+（BSL-2級+）實驗室的生物安全柜里提取病毒的核酸，進行病毒核酸檢測的實驗室要求請參照國家有關(guān)核酸檢測要求的規(guī)定。
（4）微量中和實驗、特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測陽性的采樣標本的病毒分離、尸檢標本的檢測必須在安全Ⅲ級（BSL-3 級）實驗室里操作。
（5）省級流感實驗室實驗條件：具備進行禽流感相關(guān)臨床標本初篩所需的生物安全柜、離心機、PCR 儀、電泳儀、紫外線檢測儀等配套設(shè)備。
2．國家流感中心
實驗生物安全要求：生物安全Ⅱ級+（BSL-2 級+）和生物安全Ⅲ級（BSL-3 級）實驗室。
3．省級流感實驗室職責(zé)
（1）禽流感采樣標本的臨床標本特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測；
（2）禽流感H5 的血清學(xué)檢測工作;
（3）特異性H5 的 RT-PCR 病毒核酸檢測陽性標本的病毒分離必須在生物安全Ⅲ級（BSL-3 級）實驗室；
（4）沒有生物安全Ⅲ級（BSL-3 級）實驗室的，將標本送國家流感中心做病毒的分離工作。
4．國家流感中心實驗室職責(zé)
（1）國家流感中心設(shè)立在中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感室；
（2）對各省報告的禽流感疑似病例或確診病例進行復(fù)核、確認；
（3）對不具備禽流感病毒分離條件的省份送檢標本的檢測、分離和確認；
（4）對需要做微量中和實驗的血清標本進行微量中和試驗；
（5）對各省級實驗室檢測人員的培訓(xùn)；
（6）對各省級流感實驗室的質(zhì)量控制。
三、原始標本采集
1．標本采集人員
醫(yī)療機構(gòu)的醫(yī)生、護士或當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心專業(yè)人員負責(zé)標本采集并填寫標本登記表，標本采集人員按照《禽流感職業(yè)暴露人員防護原則》做好個人防護。
2．標本采集種類和時限
（1）采集標本的種類：疑似禽流感患者的咽、*或含漱液、血清以及死亡病例的尸檢肺組織、氣管分泌物。
（2） 采集標本時間：
1）咽、*或含漱液在發(fā)病的頭3 天采集；
2）急性期血清在發(fā)病后7 天內(nèi)采集，恢復(fù)期血清在發(fā)病后2-4周采集；
3）尸檢標本尸檢時采集。
3．標本的運送：所有采集的標本應(yīng)在醫(yī)院采集時立即分裝，一式二份，其中一份單獨保存，以備復(fù)核。采集的標本若不能在24 小時內(nèi)送達，則應(yīng)盡快在－70 ℃以下保存。無－70 ℃條件的需在－20℃冰箱短時間暫存，并盡快遞送標本。
4．標本采集的方法：詳見國標《流行性感冒診斷標準及處理原則》
四、送流感中心的標本包裝、運送與接收
1．標本的包裝
（1）標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。
（2）將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標本。
（3）直接在塑料管上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、姓名，同時也將標本有關(guān)信息填在禽流感人體標本送檢登記表，連同塑料管用另一塑料袋內(nèi)密封。
（4）將裝標本的密封袋放入運輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。同一患者2 份以上的密封標本，可以放在同一個塑料袋內(nèi)再次做密封。若將進行病毒分離，可將密封好的裝有標本的容器直接放入液氮運輸罐內(nèi)運輸。所有容器必須印有生物危險標識。
2．標本運送
（1）航空或鐵路運送。
（2）專人專車運送：主要用于近距離樣品運送。
3．標本的接收
（1）各省級中心實驗室應(yīng)公布標本接收，并實行24 小時標本接收制；
（2）國家實驗室標本接收：
需送國家流感中心實驗室檢測的原始標本、病毒分離物、可疑陽性標本、血清等，填寫標本送檢登記表，在低溫保存條件下，于24小時內(nèi)送至中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感中心進行復(fù)核。國家流感中心標本接收為：中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所，地址：北京市宣武區(qū)迎新街100 號，：郭元吉、王敏，：，，（010）
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