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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：893發(fā)布時(shí)間：2011-8-12
特異性抗體免疫磁珠分選、分離、純化原代細(xì)胞
用包被特異性抗體或抗IgG抗體的免疫磁珠分選、分離、純化原代細(xì)胞的方法。
可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的原代細(xì)胞混合物中分離出很高純度的目的原代細(xì)胞。
用包被特異性抗體或抗IgG抗體可以分離出非常純的原代細(xì)胞群體，而且有*的回收率和存活率。依據(jù)細(xì)胞頻率和標(biāo)記表達(dá)水平的不同，原代細(xì)胞的純度可達(dá)95%-99.9%。 ?
基本原理：
已包被用包被特異性抗體磁珠與原代細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合，或者抗IgG抗體磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的特異性抗體結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上，實(shí)現(xiàn)陽性細(xì)胞分離或陰性細(xì)胞分離。
基本分類：
免疫磁珠法分為陽性細(xì)胞分離法和陰性細(xì)胞法：
陽性細(xì)胞分離法－磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞。
陰性細(xì)胞分離法－磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞。
一般而言，陰性細(xì)胞分離法比陽性細(xì)胞分離法的磁珠用量大。
基本步驟：
1、離心收集待分離細(xì)胞，用少量E孵育液（0.5％A、0.08％EDTA PH7.2 ，真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體）充分混懸細(xì)胞（0.5ml/1×108細(xì)胞），包被特異性抗體磁珠或抗IgG抗體，4°C孵育30分鐘。
2、用20倍體積E洗細(xì)胞一次，再加E（0.3ml/1×108細(xì)胞）充分混懸細(xì)胞后，加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠，混勻后置8～15°C孵育10～15分鐘。
3、將分離柱安裝入磁場中，加入0.5ml E，在重力作用下自然流盡，以預(yù)處理分離柱。
建議：
1、分離細(xì)胞全過程在超凈臺(tái)中完成。
2、超微磁珠及微小磁場系統(tǒng)適合于106-107細(xì)胞分離。
3、分離柱一般只能一次應(yīng)用。
4、盡量去除死細(xì)胞。
5、細(xì)胞懸液加入分離柱中時(shí)，應(yīng)將滴管伸至底壁后加入，避免將細(xì)胞懸液沿管壁流入。
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