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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：507發(fā)布時(shí)間：2012-2-3
免疫擴(kuò)散技術(shù)(immunodiffusion)是抗原或抗體成分的定性與定量分析方法,其基本原理是抗原-抗體結(jié)合形成復(fù)合物,在抗原和抗體量足夠大并且比例適當(dāng)時(shí)形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。通常采用半固態(tài)透明瓊脂凝膠作為支持介質(zhì),在凝膠中打孔裝入抗原(或抗體),抗原與抗體在介質(zhì)中擴(kuò)散并相遇,如能夠互相結(jié)合則在介質(zhì)中形成沉淀弧帶。單向擴(kuò)散法(radial immunodiffusion):在含有抗體的凝膠中挖一小槽,注入抗原,使其擴(kuò)散,如抗原與凝膠中的抗體發(fā)生反應(yīng)形成環(huán)狀乳白色沉淀帶。雙向擴(kuò)散法:在凝膠板中,打孔后挖幾個(gè)小槽;分別滴加抗原與抗體,讓其互相擴(kuò)散,互相反應(yīng)形成沉淀線。
免疫電泳( immunoelectrophoresis)系鑒定與分離可溶性抗原成分的技術(shù)。將待分析的物質(zhì)置于瓊脂凝膠板上進(jìn)行電泳分離成區(qū)帶,然后在電泳移動(dòng)軸相對(duì)的方向加入抗血清進(jìn)行擴(kuò)散?？乖c抗體結(jié)合后在特定的位置上形成沉淀線。
溶血空斑試驗(yàn)( hemolytic plaque assay)是一種計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中抗體生成細(xì)胞(漿細(xì)胞)的技術(shù)。把抗體產(chǎn)生細(xì)胞與高密度羊紅細(xì)胞懸液細(xì)胞相混,再把混合細(xì)胞均勻地懸于半固體瓊脂培養(yǎng)基中。幾小時(shí)后,瓊脂上加一層新鮮血清以提供補(bǔ)體。結(jié)合了漿細(xì)胞分泌抗體的紅細(xì)胞隨之被補(bǔ)體所溶解,在紅色背景上可見(jiàn)透亮空斑,可依此計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中分泌抗羊紅細(xì)胞IgM抗體的細(xì)胞。為檢測(cè)分泌抗羊紅細(xì)胞IgG抗體的細(xì)胞,需加入抗IgG抗體，以使羊紅細(xì)胞在加入補(bǔ)體后被溶解。將半抗原、多糖或蛋白抗原結(jié)合于羊紅細(xì)胞表面,可用以計(jì)數(shù)分泌抗這些物質(zhì)的抗體細(xì)胞。也可用此方法測(cè)定抗體產(chǎn)生細(xì)胞分泌免疫球蛋白的種類。
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