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上海酶聯(lián)生物研究所

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96T人風(fēng)疹病毒抗體IgG（RV-IgG）ELISA 檢測試劑盒北京

閱讀：327發(fā)布時(shí)間：2012-5-11

人風(fēng)疹病毒抗體IgG（RV-IgG）ELISA 檢測試劑盒北京
本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
RV-IgG試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知RV-IgG濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將RV-IgG和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中RV-IgG的濃度呈比例關(guān)系。
人風(fēng)疹病毒抗體IgG（RV-IgG）ELISA 檢測試劑盒拉北京
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋 1塊半塊即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：40IU/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml）按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml）即用型
人風(fēng)疹病毒抗體IgG（RV-IgG）ELISA 檢測試劑盒北京
*標(biāo)記的抗RV-IgG抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
40 IU/L （6號標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
20 IU/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 IU/L （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0 IU/L （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 IU/L （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25 IU/L （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 IU/L （空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（IU/L）
A 40 40 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B 20 20 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C 10 10 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D 5.0 5.0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E 2.5 2.5 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F 1.25 1.25 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G 0 0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的RV-IgG標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的RV-IgG含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-40IU/L

4、敏感度： 0.1 IU/L 抗骨骼肌抗體 ASAELISA試劑盒
甲狀腺抗體 TAbELISA試劑盒
胰島細(xì)胞抗體 ICAELISA試劑盒
抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體 SDAELISA試劑盒
抗紡錘體抗體 MSAELISA試劑盒
抗角蛋白抗體 AKAELISA試劑盒
抗中性粒細(xì)胞核周抗體 pANCAELISA試劑盒
抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 cANCAELISA試劑盒
抗凝血素抗體 aPT1/aPT2ELISA試劑盒
磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM PI Ab-IgG/IgMELISA試劑盒
β2糖蛋白1抗體IgA/G/M β2-GP1 IgA/G/MELISA試劑盒
組織蛋白酶抗體 Cath AbELISA試劑盒
乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG LF/LTF Ab-IgELISA試劑盒
抗殺菌通透性增高蛋白抗體 BPI-AbELISA試劑盒
髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG MPO-ANCA IgGELISA試劑盒
抗蛋白酶3抗體IgG PR3 Ab-IgGELISA試劑盒
抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA α-Fodrin IgG/IgAELISA試劑盒
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體 ssDNAELISA試劑盒
抗組蛋白 H2A-H2B-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體ELISA試劑盒
抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 dsDNAELISA試劑盒
抗核小體抗體IgG AnuA-IgGELISA試劑盒

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