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上海酶聯(lián)生物研究所

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96T人胰島素原（Proinsulin） ELISA 檢測試劑盒上海

閱讀：542發(fā)布時間：2012-5-16

人胰島素原（Proinsulin） ELISA 檢測試劑盒上海
本試劑僅供研究使用標本：血清或血漿

試驗原理：
Proinsulin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Proinsulin濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將Proinsulin和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Proinsulin的濃度呈比例關系。

人胰島素原（Proinsulin） ELISA 檢測試劑盒上海
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋 1塊半塊即用型
標準品：8.0ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml）即用型
人胰島素原（Proinsulin） ELISA 檢測試劑盒上海
*標記的抗Proinsulin抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
8.0 ng/ml （6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
4.0 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.0 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.0 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.5 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
標準品濃度（ng/ml）
A 8.0 8.0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B 4.0 4.0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C 2.0 2.0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D 1.0 1.0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E 0.5 0.5 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F 0.25 0.25 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G 0 0 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H 樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的Proinsulin標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的Proinsulin含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-8.0ng/ml

4、敏感度： 0.01 ng/ml
骨成型蛋白受體1A BMPR-1AELISA試劑盒
骨成型蛋白4 BMP-4ELISA試劑盒
骨成型蛋白2 BMP-2ELISA試劑盒
* cAMPELISA試劑盒
甘露聚糖結(jié)合凝集素相關*蛋白酶 MASPELISA試劑盒
周期素依賴性激酶7 CDK-7ELISA試劑盒
周期素依賴性激酶2 CDK-2ELISA試劑盒
周期素依賴性激酶1 CDK-1ELISA試劑盒
磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶 AMPKELISA試劑盒
乳酸脫氫酶 LDHELISA試劑盒
解整合素樣金屬蛋白酶9 ADAM9ELISA試劑盒
β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2 BACE2ELISA試劑盒
*核苷磷酸化酶1 UPP1ELISA試劑盒
乙醇脫氫酶 ADHELISA試劑盒
乙醛脫氫酶 ALDHELISA試劑盒
Rho家族GTP酶1 RND1ELISA試劑盒
受體TNFRSF結(jié)合**激酶2 RIPK2ELISA試劑盒
磷脂爬行酶1 PLSCR1ELISA試劑盒
3-羥基-3-甲基戊二酰*合酶1 HMGCS1ELISA試劑盒
嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員12 EAR12ELISA試劑盒
嗜酸性白血球相關之RNA水解酵素家族成員3 EAR3ELISA試劑盒

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