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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：425發(fā)布時(shí)間：2012-6-18
泰樂菌素（Tylosin）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中泰樂菌素（Tylosin）殘留的定量檢測。
2 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有泰樂菌素（Tylosin）偶聯(lián)抗原，加入泰樂菌素（Tylosin）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離泰樂菌素（Tylosin）與微孔條上預(yù)包被的泰樂菌素（Tylosin）偶聯(lián)抗原互相競爭抗泰樂菌素（Tylosin）抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中泰樂菌素（Tylosin）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中泰樂菌素（Tylosin）的含量。
3 試劑盒組成
3.1 預(yù)包被的泰樂菌素（Tylosin）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。3.2 泰樂菌素（Tylosin）標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0 ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb
泰樂菌素（Tylosin）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
3.3抗泰樂菌素（Tylosin）抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。3.4顯色液A：1瓶（6ml）。3.5顯色液B：1瓶（6ml）。3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7*：1瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9說明書一份。
4 需要而未提供的材料4.1 設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。 4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2 試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2 甲醇。5 貯存5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6 注意事項(xiàng)6.1 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。6.2 不要使用過期試劑盒。6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有泰樂菌素（Tylosin），使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5 終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7 不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的*，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9 混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7 工作液準(zhǔn)備7.1 泰樂菌素（Tylosin）標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0 ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1 ppb
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用
7.3 *：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照7.4 反應(yīng)終止液：泰樂菌素（Tylosin）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
已備用8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1.1 牛奶脫脂奶：直接分析。全脂奶：13000g離心15分鐘，取上清液檢測（避免取到乳脂）8.1.2 肝臟： （稀釋倍數(shù)2）--稱取2g已絞碎的樣品到試管中。--加入14ml的乙腈，然后均質(zhì)（用20000rpm均質(zhì)幾分鐘）。--振蕩15分鐘，然后2500g離心15分鐘。--取上清液1ml到另一玻璃管中在40-50℃下蒸干（利用氮?dú)獯蹈蓛x或者旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器）。--加入250μl去離子水并漩渦混合。--溶液待測。8.1.3 雞蛋： （稀釋倍數(shù)2）--取2g樣品到試管中，加入6mL乙腈。--振蕩15分鐘，然后3000g離心15分鐘。--取上清液1ml到另一玻璃管中蒸干（40-50℃）。--加入500μl去離子水并漩渦混合。--溶液待測。8.1.4 蜂蜜： （稀釋倍數(shù)2）---取蜂蜜2g，置于離心管中（約15mL），加入4mL水溶解。--加入2ml 乙酸乙脂后，振蕩均勻。--然后3000rpm，離心15分鐘。--取上清液0.5ml置于萃取管中于水浴60℃下以氮?dú)獯蹈伞?-加入0.5ml去離子水混合，振蕩約10秒鐘。--取100μl 待測。推薦使用的其它樣品的前處理方法：8.2.1 組織樣： （稀釋倍數(shù)1）--取3g絞碎樣品置入50ml離心管中。--加入6ml乙酸乙酯均質(zhì)。--以3000g離心10分鐘。--取2ml上清液置入10ml塞玻璃管中，于水浴50℃下以氮?dú)獯蹈伞?-于此玻璃管中加入2ml正己烷，振蕩混合。--再加入1ml去離子水，振蕩混合約10秒鐘，以離心機(jī)3,000g離心10分鐘。--利用吸管吸去包含中間乳化層部分的上層液（正己烷層）；--取50μl待測。8.2.2 血清血漿： （稀釋倍數(shù)1）--移取1ml血清或血漿至試管中，加2ml乙酸乙酯振蕩1分鐘。--室溫3000g離心10分鐘。--移取1ml上層的乙酸乙酯至另一試管中，用氮?dú)饬?0 oC水浴中吹干。--殘留物用0.5ml去離子水溶解。--取100ul 待測。8.2.3 飼料樣品： （稀釋倍數(shù)4）--取1g飼料樣品（精細(xì)粉碎過的，有代表性的），放入離心管中。--加4ml乙酸乙酯劇烈混合1分鐘（用可旋轉(zhuǎn)振蕩搖床）--室溫3000g離心10分鐘。--移取1ml上層的乙酸乙酯至另一試管中，60 oC氮?dú)饬飨抡舾伞?--用1ml異辛烷/氯仿混合物（2:3混合）溶解干燥的殘留物。--加入1ml去離子水強(qiáng)烈振蕩1分鐘。--室溫3000g離心10分鐘。--取100μl上層水相待測。8.2.4 尿液： （快速處理方法）--尿液不用處理，直接測定。（如果尿液渾濁，一定要過濾或離心）9 酶免分析步驟9.1 實(shí)驗(yàn)須知9.1.1 實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3 請不要改變分析程序9.1.4 請使用的微量移液器9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作9.1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8 加樣時(shí)請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2 分析步驟9.2.1 預(yù)*行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗泰樂菌素（Tylosin）抗體酶結(jié)合物9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。 9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。9.4 反應(yīng)9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻9.4.2 37℃溫浴10min9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10 結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以泰樂菌素（Tylosin）濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為泰樂菌素（Tylosin）濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測定液中泰樂菌素（Tylosin）濃度C（ppb）10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。 10.2 半定量測定10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
11 特異性物質(zhì) 交叉反應(yīng)
泰樂菌素（Tylosin） 100%12 試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.05ppbB0吸光度*值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。13 標(biāo)準(zhǔn)曲線模式（僅供參考）試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。
14 分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
白介素受體相關(guān)激酶 IRAKELISA試劑盒
* UKELISA試劑盒
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 PCKELISA試劑盒
* trypsinELISA試劑盒
β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1（BACE1）ELISA試劑盒
蛋白二硫化物異構(gòu)酶前體 PDIELISA試劑盒
蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3 PDIA3ELISA試劑盒
*脫氫酶 SDHELISA試劑盒
肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶 PPIELISA試劑盒
*氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶 OCISA試劑盒
內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑 vaspinELISA試劑盒
蛋白磷酸酶 PPELISA試劑盒
硫氧還蛋白還原酶 TrxRELISA試劑盒
白細(xì)胞彈性蛋白酶 HLEELISA試劑盒
商鋪：http://www.kytsldc.cn/st32881/
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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