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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：265發(fā)布時間：2012-7-16
赭曲霉毒素（OT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：赭曲霉毒素（OT）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中赭曲霉毒素（OT）含量。
實(shí)驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中赭曲霉毒素（OT）水平。用純化的赭曲霉毒素
（OT）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入赭曲霉毒素（OT）
抗原，再與 HRP 標(biāo)記的赭曲霉毒素（OT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)
過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)
赭曲霉毒素（OT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的赭曲霉毒素（OT）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm
波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中赭曲霉毒素（OT）抗原濃度。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（270ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
赭曲霉毒素（OT）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品 100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為180ng/L，120ng/L ，60ng/L，30ng/L， 15ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔的*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，
計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
檢測范圍：
10ng/L -200ng/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月小鼠血清總補(bǔ)體（CH50）ELISA試劑盒
小鼠可溶性CD86（B7-2/sCD86）ELISA試劑盒
小鼠胰島素（INS）ELISA試劑盒
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）ELISA試劑盒
小鼠新生甲狀腺素（NN-T4）ELISA試劑盒
小鼠胰淀素（Amylin）ELISA試劑盒
小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸（Free-T3）ELISA試劑盒
小鼠白三烯C4（LTC4）ELISA試劑盒
小鼠*（Cyt-C）ELISA試劑盒
小鼠游離甲狀腺素（FT4）ELISA試劑盒
小鼠血管緊張素Ⅰ（Ang-Ⅰ）ELISA試劑盒
商鋪：http://www.kytsldc.cn/st32881/
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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