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技術(shù)文章

細(xì)胞樣本的前處理

閱讀:130發(fā)布時(shí)間:2015-8-19

一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶(hù)可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細(xì)胞樣本的前處理:

1、細(xì)胞沉淀的收集:

① 懸浮細(xì)胞: 對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,直接通過(guò)離心收集細(xì)胞沉淀,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

② 貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,用*將細(xì)胞消化下來(lái),或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來(lái),將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

我們一般建議客戶(hù),細(xì)胞密度不要小于一百萬(wàn)個(gè)/ml。

2、細(xì)胞沉淀的洗滌:

在細(xì)胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

重復(fù)上述操作反復(fù)洗滌1~2次。

3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿:在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動(dòng)勻漿3分鐘,然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

     a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。

      b、用超聲細(xì)胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復(fù)4~5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的,或者說(shuō)作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑,zui厲害,基本可以把細(xì)胞*破掉,DNA會(huì)釋放出來(lái),裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對(duì)核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會(huì)使蛋白變性失活)。

去垢劑屬性只是一方面,buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶活力的測(cè)定有一定的影響,一般不推薦用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,放低溫冰箱中結(jié)冰,溶解,再結(jié)冰,再溶解,反復(fù)3次左右)。

                由于反復(fù)凍融對(duì)酶活力影響較大,一般不推薦使用



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產(chǎn)品:

庚烷磺酸鈉對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:7440-60-0,鈥標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
23-乙酰澤瀉醇B標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
川楝素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:58812-37-6對(duì)照品
炔草酸標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:105512-06-9
芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品,cas:7431-77-8對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
L-異*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
酒石酸*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
江南卷柏對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
4-甲氧基水楊醛標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
酸棗仁對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*鈉標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
蔚瑞昆森標(biāo)準(zhǔn)品,cas:19950-55-1對(duì)照品
硒對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
柳穿魚(yú)葉苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
[4-(3-甲基苯氨基)-3-吡啶磺酰胺](拖拉塞米雜質(zhì)A)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
4'-去甲基*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:17680-84-1,高車(chē)前苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
番瀉葉山柰苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:482-39-3對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
熔點(diǎn)溫度計(jì)(0℃~120℃)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
燕麥靈標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:101-27-9
CAS:3861-47-0,辛酰碘苯腈標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
抗螨唑標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:14255-88-0
金縷梅丹寧酸標(biāo)準(zhǔn)品,cas:469-32-9對(duì)照品
CAS:88497-87-4,Manassantin A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
(La,Ce,Pr,Nd,Sm,Eu,Gd,Tb,Dy,Ho,Er,Tm,Yb,Lu,Y,Sc)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(混標(biāo))標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:7440-50-8
CAS:2464-37-1,整形醇標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*雜質(zhì)A(m-甲酚-4-磺酸銨)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:20243-59-8,羥基芫花素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
染料木素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:446-72-0對(duì)照品
CAS:19885-10-0,澤瀉醇A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
當(dāng)歸素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:523-50-2對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
化學(xué)耗氧量(COD)-鉻法標(biāo)準(zhǔn)溶液
余甘子對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
五味子酯戊標(biāo)準(zhǔn)品,cas:64917-83-5對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
皮蠅磷標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:299-84-3
抗眼鏡蛇毒原血漿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:63-25-2,西維因標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*酶(大腸)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:123940-54-5,竹紅菌乙素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
蘆薈苷對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
青蒿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
蘇木對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:33069-62-4,*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
鹽酸安他唑啉對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*味對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
氟喹唑標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:136426-54-5
防己諾林堿(漢防己乙素)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
木鱉子對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
臭靈丹對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
安果標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:2540-82-1
人參皂苷F1標(biāo)準(zhǔn)品,cas:53963-43-2對(duì)照品
大黃酚對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
魯斯皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品,cas:472-11-7對(duì)照品
異連翹酯苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:1357910-26-9對(duì)照品
大豆皂苷Ab標(biāo)準(zhǔn)品,cas:118194-13-1對(duì)照品
CAS:82841-67-6,平貝堿甲標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
雙水二氨環(huán)已烷鉑二硝酸鹽(*雜質(zhì))對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
箭根薯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:2752-65-0,藤黃酸標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:7008-42-6,山油柑堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
甘松對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
福美雙標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
CAS:477-85-0,決明蒽醌標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
羊開(kāi)口對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
高良姜素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:548-83-4對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
番瀉苷B標(biāo)準(zhǔn)品,cas:128-57-4對(duì)照品
水防風(fēng)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:24017-47-8,三唑磷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
醉椒素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:500-64-1對(duì)照品
甲胺基阿維菌素苯甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:155569-91-8
CAS:33377-72-9,茶黃素-3,3’-雙沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
二甲基亞砜對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
天芥菜堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:303-33-3對(duì)照品
溴丙胺肽林對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品,cas:102518-79-6對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
肉桂對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:101205-02-1,噻草酮標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
商陸皂苷E標(biāo)準(zhǔn)品,cas:65649-36-7對(duì)照品
紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
茜素雙酯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:19309-14-9,豆蔻明標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:1929-82-4,氯草定標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

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