細(xì)菌基因組*說明書報(bào)價(jià)

試劑盒組成：
 D1600-20 D1600-50 D1600-100次
Rnase A 400μl 1ml    2ml
蛋白酶K 400μl 1ml    2ml
溶液A 4ml 10ml    20ml
溶液B 4ml 10ml   20ml
漂洗液 6ml 15ml    30.ml
洗脫液 4ml 10ml    20ml
吸附柱 20個(gè) 50個(gè) 100個(gè)
收集管 20個(gè) 50個(gè) 100個(gè)
 

 細(xì)菌基因組*說明書報(bào)價(jià)

說明書 1份 1份 1份
  注：該試劑盒置于室溫（15℃-25℃）干燥條件下可保存12個(gè)月，更長時(shí)間保存可置2℃-8℃

產(chǎn)品簡介：
    本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)提取細(xì)菌的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*的新型材料，能夠、專一吸附DNA，可zui大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提高的基因組 段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
        使用本試劑盒提取的細(xì)菌基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等試驗(yàn)。

操作步驟：
   使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、 取細(xì)菌培養(yǎng)液1ml，12000rpm離心1min,盡量吸盡上清。
2、 向細(xì)菌沉淀中加入200ul溶液A，振蕩至菌體充分懸?。ㄈ绻烁锾m氏陽細(xì)菌，可在次步驟中加入終濃度為20mg/ml的*），加入200ul  10mg/ml的RNase A,37℃放置15-30min.
3、 向管中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混均，55℃消化30-60min，期間可顛倒離心管混均次數(shù)，直至樣品消化*為止。消化*的標(biāo)志是：液體清亮及粘稠。
4、 向管中加入200ul溶液B,充分混均。如出現(xiàn)白色沉淀，可放75℃15-30min，沉淀既會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導(dǎo)致DNA量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子。
5、 向管中加入200ul無水乙醇，充分混均，此時(shí)可能回出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min
6、 12000rpm離心1min，廢棄液，將吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入700ul漂洗液（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm離心1min,廢棄液，將吸附柱放入收集管中。
8、 向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min,廢棄液，將吸附柱放入收集管中。
9、 12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘留的漂洗液去除，否者漂洗液中的乙醇回影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等
10、 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加500-200ul經(jīng)75℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。
11、 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm,離心2min,即可得到高質(zhì)量的細(xì)菌基因組DNA.
注意事項(xiàng)：
1、 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 段較小且提取量也下降。
2、 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
3、 如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長離心時(shí)間。
4、 洗脫緩沖液的體積不少于50ul，體積過小會(huì)影響回收效率；洗脫液的PH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其PH值在8.0左右（可用NaOH將水的PH值調(diào)至此范圍），PH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
5、 DNA濃度及純度檢測：得到的基因組 段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的 段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA、40ug/ml單鏈DNA。OD260/ OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)镻H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。
 

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