C1q放射免疫測定法
1 原理本法系將同位素標記的C1q與被檢血清作用，然后用聚乙二醇（MW6 000）沉淀免疫復(fù)合物與標記C1q的結(jié)合物，通過測定沉淀物中的放射強度，再計算與對照的放射強度之比，作為免疫復(fù)合物的相對含量。
2 材料PEG（MW6 000）、CFD稀釋液（即VBS）、10%三氯醋酸、離心機、C1q溶液。
3 方法
（1） C1q標記法C1q的同位素標記，一般用125I，也可用131I。
125I的標記有兩種方法，即氯胺T法和乳過氧化物酶法。下面介紹氯胺T法：①在100μl C1q（1mg/ml）中，加入100μCi125I，混勻，然后加入25μl 04mol/L PB（pH值7.4，含1mg氯胺T），冰浴中攪拌4～6min；
②立即加入50μg/μl偏重亞硫酸鉀中止反應(yīng)，再加入50μl 1%牛血清白蛋白作為載體蛋白；
③過Sephadex G25柱（20cm×05cm，預(yù)先用pH值74、04mol/L PB平衡，并注入1ml 1%牛血清白蛋白），以與游離125I 分開；
④以適當濃度分裝后，放－70℃保存。為減少自身凝集，加入002%Tween20。
（2） 取標記好的C1q，用CFD稀釋到1mg/ml。
（3） 7 000r/min離心30min（4℃），除去不溶性凝聚蛋白，上清液存放于4℃。
（4） 取試管4支，每管加測定血清02ml，CFD 02ml，標記C1q 50μl（1μg/ml）。1、2管為測定管，3、4管為對照管。
（5） 搖勻后，放25℃溫箱60min，取出再放4℃冰箱60min。
（6） 各管加3ml PEG，zui終濃渡為25%，搖勻后，放4℃ 2h。
（7） 3、4管加10%三氯醋酸，沉淀所有的蛋白。將4個管都以1 000r/min離心20min，去上清液，沉淀物放γ計數(shù)器內(nèi)測cpm。
（8） 計算
B=（a+b2+c+d2）×100
B：標記C1q結(jié)合量（%）。a、b：1、2管（測定管）cpm。c、d：3、4管（對照管）cpm。
實驗步驟
1. C1q標記法C1q的同位素標記，一般用125I，也可用131I。
125I的標記有兩種方法，即氯胺T法和乳過氧化物酶法。下面介紹氯胺T法：
1） 在100μl C1q（1mg/ml）中，加入100μCi125I，混勻，然后加入25μl 0.4mol/L PB（pH值7.4，含1mg氯胺T），冰浴中攪拌4～6min；
2） 立即加入50μg/μl偏重亞硫酸鉀中止反應(yīng)，再加入50μl 1%牛血清白蛋白作為載體蛋白；
3） 過Sephadex G25柱（20cm×0.5cm，預(yù)先用pH值7.4、0.4mol/L PB平衡，并注入1ml 1%牛血清白蛋白），以與游離125I 分開；
4） 以適當濃度分裝后，放-70℃保存。為減少自身凝集，加入0.02%Tween20。
2. 取標記好的C1q，用CFD稀釋到1mg/ml。
3. 7 000r/min離心30min（4℃），除去不溶性凝聚蛋白，上清液存放于4℃。
4. 取試管4支，每管加測定血清0.2ml，CFD 0.2ml，標記C1q 50μl（1μg/ml）。1、2管為測定管，3、4管為對照管。
5. 搖勻后，放25℃溫箱60min，取出再放4℃冰箱60min。
6. 各管加3ml PEG，zui終濃渡為2.5%，搖勻后，放4℃ 2h。
7. 3、4管加10%三氯醋酸，沉淀所有的蛋白。將4個管都以1 000r/min離心20min，去上清液，沉淀物放γ計數(shù)器內(nèi)測cpm。
8. 計算
B=（a加b2加c加d2）×100
B：標記C1q結(jié)合量（%）。a、b：1、2管（測定管）cpm。c、d：3、4管（對照管）cpm。
