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技術(shù)文章

大鼠細胞凋亡相關(guān)基因ELISA試劑盒操作步驟

閱讀:877發(fā)布時間:2011-2-16

                                        大鼠細胞凋亡相關(guān)基因ELISA試劑盒操作步驟

操作步驟
1.         標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

200μg/L
5號標(biāo)準品
150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
100μg/L
4號標(biāo)準品
150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
50μg/L
3號標(biāo)準品
150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
25μg/L
2號標(biāo)準品
150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
12.5μg/L
1號標(biāo)準品
150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

 
 
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
公司主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,Omega試劑盒,放免試劑盒,ATCC細胞,血清,抗體,生物科研試劑、實驗耗材等

 


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