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標(biāo)本取樣-關(guān)于組織細(xì)胞裂解方法

閱讀:723發(fā)布時(shí)間:2011-11-1

 

對(duì)于組織樣品:
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
上海恒遠(yuǎn)主營(yíng)產(chǎn)品/服務(wù):ELISA試劑盒,免疫組化試劑盒,放免試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,血清,抗體,培養(yǎng)基,細(xì)胞,生物試劑,實(shí)驗(yàn)耗材等
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