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上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司


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技術(shù)文章

上海恒遠(yuǎn)專業(yè)提供:人白細(xì)胞介素2(IL-2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

閱讀:434發(fā)布時(shí)間:2012-5-8

 

   上海恒遠(yuǎn)專業(yè)提供人白細(xì)胞介素2(IL-2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍:                                                                                                                    96T
40pg/ml-1200pg/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素2(IL-2)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素 2(IL-2)水平。用純化的人白細(xì)
胞介素 2(IL-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介
素 2(IL-2) ,再與HRP 標(biāo)記的白細(xì)胞介素2(IL-2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)
合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素 2(IL-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)
儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白細(xì)胞介素2(IL-2)
濃度。  
試劑盒組成  
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(2400pg/ml) 0.5ml×1 瓶
酶標(biāo)包被板 12 孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張    
顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求  
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
1200pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
600pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
75pg/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl, 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
然后再加待測(cè)樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。  
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式, 將樣品的OD值代入方程式, 計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。  
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值) ,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存: ;2-8
2.有效期:6個(gè)月
上海恒遠(yuǎn)專業(yè)提供“人白細(xì)胞介素2(IL-2)試劑盒”,*,值得信賴!                                
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主營(yíng)產(chǎn)品/服務(wù):ELISA試劑盒,免疫組化試劑盒,放免試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,血清,抗體,培養(yǎng)基,細(xì)胞,生物試劑,實(shí)驗(yàn)耗材等 公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國(guó)科研事業(yè)添磚加瓦。
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