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上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司


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技術(shù)文章

上海恒遠(yuǎn)為大家提供:大鼠促卵泡生長激素(FSH)操作步驟elisa法

閱讀:412發(fā)布時間:2012-6-15

大鼠促卵泡生長激素(FSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                                                                                  96T
0.7 IU/L -24 IU/L
 
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促卵泡生長激素(FSH)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠促卵泡生長激素(FSH)水平。用純化的大
鼠促卵泡生長激素(FSH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
促卵泡生長激素(FSH),再與 HRP 標(biāo)記的促卵泡生長激素(FSH)抗體結(jié)合,形成抗體-
抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成
藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促卵泡生長激素(FSH)
呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠
促卵泡生長激素(FSH)濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品(48 IU/L)  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑 B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標(biāo)本要求  
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
24 IU/L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12 IU/L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6 IU/L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3 IU/L  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5 IU/L  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。      
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同 3。
8.  洗滌:操作同 5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 
計算 

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。  
注意事項 注意事項 注意事項 注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月 
 

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主營:ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒。進(jìn)口原裝的,進(jìn)口分裝的,國產(chǎn)的均有。價位也分高中低來供客戶選擇。產(chǎn)品有任何質(zhì)量問題,我們都是承諾免費包換的!
公司是成了了專門的技術(shù)部門,與同行業(yè)相比,實力雄厚,聘請了6位留學(xué)博士。以下是我們對客戶的承諾:有質(zhì)量問題,免費包換。售前售中售后全程提供技術(shù)指導(dǎo)。提供免費代測服務(wù)!
如果你想了解更多“大鼠促卵泡生長激素(FSH)試劑盒”操作步驟,歡迎廣大科研用戶來電來函!

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