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閱讀:485發(fā)布時(shí)間:2012-6-26
分子抗體包括抗原結(jié)合片段(fragmentofantigenbinding,F(xiàn)ab),可變區(qū)片段(fragment Of variable,F(xiàn)v),單鏈可變區(qū)片段(single chain fragment Of variable,ScFv)和單區(qū)抗體(singledomainantibody,SdAb)等。
(一)Fab
Fab片段由H鏈Pd段和完整L鏈通過二硫鍵形成的異二聚體,僅含一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。用木瓜水解酶消化抗體可獲得2個(gè)Fab片段。在Fab基因表達(dá)時(shí),5,端帶上細(xì)菌蛋白信號(hào)肽基因的Fd基因和L鏈基因,可在大腸桿菌細(xì)胞壁的周質(zhì)腔內(nèi)分泌型表達(dá),形成完整的立體折疊和鏈內(nèi)、鏈間二硫鍵,保持Fab片段的功能。
Fv是由L鏈和H鏈V區(qū)組成的單價(jià)小分子,是與抗原結(jié)合的zui小功能片段。在Fv的基因工程技術(shù)中,可以分別構(gòu)建含VH和VI。基因的載體,共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,使之各自表達(dá)后組裝成功能性Fv分子;或者載體中的VH和VL之間設(shè)置終止碼,分別表達(dá)2個(gè)小分子片段。H鏈和L鏈的V區(qū)可由非共價(jià)鍵結(jié)合在一起形成Fv,并能保持特異結(jié)合抗原的能力。
(三)ScFv
用適當(dāng)?shù)墓押塑账峤宇^將L鏈和H鏈的V區(qū)連接起來,使之形成單一的多肽鏈,稱為單鏈抗體(single chainFv,ScFv)。多肽鏈能自發(fā)折疊成天然構(gòu)象,保持Fv的特異性和親和力,它的穩(wěn)定性大大提高了。ScFv中連接DNA(1inkerDNA)的設(shè)計(jì)原則是DNA接頭編碼的氨基酸不干擾VH和VL的立體構(gòu)象和妨礙抗原結(jié)合部位,其氨基酸組成應(yīng)當(dāng)為親水性和側(cè)鏈少,便于折疊和減少抗原性。一般由*組成(Gly4Ser)n,它的長(zhǎng)度至少含10個(gè)氨基酸殘基,通常是14或15個(gè)氨基酸殘基。ScFv的優(yōu)點(diǎn)是分子量小,免疫原性弱,滲透力強(qiáng),并可用于藥物導(dǎo)向、中和毒素等功能。缺點(diǎn)是無抗體C區(qū),不能介導(dǎo)抗體的其他生物學(xué)效應(yīng)。
(四)SdAb
根據(jù)抗體分子的結(jié)構(gòu),一般將Fv稱作抗體的zui小單位,但有些更小的亞單位仍具有結(jié)合抗原的能力。如單獨(dú)重鏈可變區(qū)仍可保留與抗原結(jié)合的能力,而且保持了完整抗體的特異性,稱為單區(qū)抗體,它的親和力低于完整的Fv。單區(qū)抗體大小只有完整IgG分子的1/12,故更容易穿入細(xì)胞,到達(dá)完整抗體不能接近的部位。單區(qū)抗體有望作為具有抗原特異性的基本單位,用來構(gòu)建有效應(yīng)功能和結(jié)合親和性的抗體。
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