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上海恒遠生物科技有限公司
閱讀:604發(fā)布時間:2012-6-26
分子抗體包括抗原結合片段(fragmentofantigenbinding,F(xiàn)ab),可變區(qū)片段(fragment Of variable,F(xiàn)v),單鏈可變區(qū)片段(single chain fragment Of variable,ScFv)和單區(qū)抗體(singledomainantibody,SdAb)等。
(一)Fab
Fab片段由H鏈Pd段和完整L鏈通過二硫鍵形成的異二聚體,僅含一個抗原結合位點。用木瓜水解酶消化抗體可獲得2個Fab片段。在Fab基因表達時,5,端帶上細菌蛋白信號肽基因的Fd基因和L鏈基因,可在大腸桿菌細胞壁的周質腔內分泌型表達,形成完整的立體折疊和鏈內、鏈間二硫鍵,保持Fab片段的功能。
Fv是由L鏈和H鏈V區(qū)組成的單價小分子,是與抗原結合的zui小功能片段。在Fv的基因工程技術中,可以分別構建含VH和VI?;虻妮d體,共轉染細胞,使之各自表達后組裝成功能性Fv分子;或者載體中的VH和VL之間設置終止碼,分別表達2個小分子片段。H鏈和L鏈的V區(qū)可由非共價鍵結合在一起形成Fv,并能保持特異結合抗原的能力。
(三)ScFv
用適當?shù)墓押塑账峤宇^將L鏈和H鏈的V區(qū)連接起來,使之形成單一的多肽鏈,稱為單鏈抗體(single chainFv,ScFv)。多肽鏈能自發(fā)折疊成天然構象,保持Fv的特異性和親和力,它的穩(wěn)定性大大提高了。ScFv中連接DNA(1inkerDNA)的設計原則是DNA接頭編碼的氨基酸不干擾VH和VL的立體構象和妨礙抗原結合部位,其氨基酸組成應當為親水性和側鏈少,便于折疊和減少抗原性。一般由*組成(Gly4Ser)n,它的長度至少含10個氨基酸殘基,通常是14或15個氨基酸殘基。ScFv的優(yōu)點是分子量小,免疫原性弱,滲透力強,并可用于藥物導向、中和毒素等功能。缺點是無抗體C區(qū),不能介導抗體的其他生物學效應。
(四)SdAb
根據(jù)抗體分子的結構,一般將Fv稱作抗體的zui小單位,但有些更小的亞單位仍具有結合抗原的能力。如單獨重鏈可變區(qū)仍可保留與抗原結合的能力,而且保持了完整抗體的特異性,稱為單區(qū)抗體,它的親和力低于完整的Fv。單區(qū)抗體大小只有完整IgG分子的1/12,故更容易穿入細胞,到達完整抗體不能接近的部位。單區(qū)抗體有望作為具有抗原特異性的基本單位,用來構建有效應功能和結合親和性的抗體。
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