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技術(shù)文章

上海恒遠為大家提供:小分子抗體的組成要素

閱讀:479發(fā)布時間:2012-6-26

    分子抗體包括抗原結(jié)合片段(fragmentofantigenbinding,F(xiàn)ab),可變區(qū)片段(fragment Of variable,F(xiàn)v),單鏈可變區(qū)片段(single chain fragment Of variable,ScFv)和單區(qū)抗體(singledomainantibody,SdAb)等。

    (一)Fab

    Fab片段由H鏈Pd段和完整L鏈通過二硫鍵形成的異二聚體,僅含一個抗原結(jié)合位點。用木瓜水解酶消化抗體可獲得2個Fab片段。在Fab基因表達時,5端帶上細菌蛋白信號肽基因的Fd基因和L鏈基因,可在大腸桿菌細胞壁的周質(zhì)腔內(nèi)分泌型表達,形成完整的立體折疊和鏈內(nèi)、鏈間二硫鍵,保持Fab片段的功能。

    Fv是由L鏈和H鏈V區(qū)組成的單價小分子,是與抗原結(jié)合的zui小功能片段。在Fv的基因工程技術(shù)中,可以分別構(gòu)建含VH和VI。基因的載體,共轉(zhuǎn)染細胞,使之各自表達后組裝成功能性Fv分子;或者載體中的VH和VL之間設(shè)置終止碼,分別表達2個小分子片段。H鏈和L鏈的V區(qū)可由非共價鍵結(jié)合在一起形成Fv,并能保持特異結(jié)合抗原的能力。

    (三)ScFv

    用適當?shù)墓押塑账峤宇^將L鏈和H鏈的V區(qū)連接起來,使之形成單一的多肽鏈,稱為單鏈抗體(single chainFv,ScFv)。多肽鏈能自發(fā)折疊成天然構(gòu)象,保持Fv的特異性和親和力,它的穩(wěn)定性大大提高了。ScFv中連接DNA(1inkerDNA)的設(shè)計原則是DNA接頭編碼的氨基酸不干擾VH和VL的立體構(gòu)象和妨礙抗原結(jié)合部位,其氨基酸組成應(yīng)當為親水性和側(cè)鏈少,便于折疊和減少抗原性。一般由*組成(Gly4Ser)n,它的長度至少含10個氨基酸殘基,通常是14或15個氨基酸殘基。ScFv的優(yōu)點是分子量小,免疫原性弱,滲透力強,并可用于藥物導(dǎo)向、中和毒素等功能。缺點是無抗體C區(qū),不能介導(dǎo)抗體的其他生物學(xué)效應(yīng)。

    (四)SdAb

    根據(jù)抗體分子的結(jié)構(gòu),一般將Fv稱作抗體的zui小單位,但有些更小的亞單位仍具有結(jié)合抗原的能力。如單獨重鏈可變區(qū)仍可保留與抗原結(jié)合的能力,而且保持了完整抗體的特異性,稱為單區(qū)抗體,它的親和力低于完整的Fv。單區(qū)抗體大小只有完整IgG分子的1/12,故更容易穿入細胞,到達完整抗體不能接近的部位。單區(qū)抗體有望作為具有抗原特異性的基本單位,用來構(gòu)建有效應(yīng)功能和結(jié)合親和性的抗體。

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