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人內(nèi)皮素-1(ET-1)說明書

閱讀:465發(fā)布時間:2012-01-11

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人內(nèi)皮素-1(ET-1)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                                                                                    96T
8pg/ml-200pg/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素-1(ET-1)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人內(nèi)皮素-1(ET-1)水平。用純化的人內(nèi)皮素-1
(ET-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素-1(ET-1) ,
再與HRP 標記的內(nèi)皮素-1(ET-1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗
滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素-1(ET-1)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測
定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人內(nèi)皮素-1(ET-1)濃度。  
試劑盒組成  
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品(400pg/ml)  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
200pg/ml  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
100pg/ml  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
50pg/ml  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
25pg/ml  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
12.5pg/ml  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
 
 
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同3。
8.  洗滌:操作同5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
 
 
計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式, 將樣品的OD值代入方程式, 計算出樣品濃度, 再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。  
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6個月 
 


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