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人麻疹病毒(MV)說明書間接法

閱讀:624發(fā)布時間:2012-02-21

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人 人人 人麻疹病毒 麻疹病毒 麻疹病毒 麻疹病毒( (( (MV) MV) MV) MV)酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫 酶聯(lián)免疫分析 分析 分析 分析( (( (ELISA) )) )     
試劑 試劑 試劑 試劑盒使用說明書 盒使用說明書 盒使用說明書 盒使用說明書     
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的 使用目的 使用目的 使用目的: :: :
本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中麻疹病毒  (MV)含量。
實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中人麻疹病毒  (MV)水平。用純化的人麻疹病毒  (MV)抗
體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的麻疹病毒  (MV)
標準品和未知濃度的麻疹病毒  (MV)待檢樣品,溫育后,加入*標記的抗 IgG抗體,再
與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
麻疹病毒  (MV)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線
計算樣品中人麻疹病毒  (MV)濃度。  
試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成 試劑盒組成  
1  20 倍濃縮洗滌液  50ml×1 瓶  標準品 S1(160 IU/L)  0.5ml×1瓶
2  鏈霉親和素-HRP  6ml×1 瓶  標準品 S2(80 IU/L)  0.5ml×1瓶
3  酶標包被板  12孔×8條  標準品 S3(40IU/L)  0.5ml×1瓶
4  *標記的抗-IgG 抗體  6ml×1 瓶  標準品 S4(20 IU/L)  0.5ml×1瓶
5  顯色劑A 液  6ml×1 瓶
 
 
9
標準品 S5(10IU/L)  0.5ml×1瓶  
6  顯色劑 B液  6ml×1/瓶  10  密封袋  1 個
7  終止液  6ml×1 瓶  11  封板膜  3 張
8  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  12  說明書  1 份
 
標本要求 標本要求 標本要求 標本要求  
1.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)
孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣
品孔。然后在標準品孔中加入標準品 50µl,在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品 10µl 再加
入樣品稀釋液 40µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育
45 分鐘。
3.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
4.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 4次,拍干。
5.  加*標記的抗-IgG 抗體:每孔加入*標記的抗-IgG 抗體 50µl。37℃溫育 30 分
鐘 6.  洗滌:操作同 4。
7.  加鏈霉親和素-HRP:每孔加入 50µl 的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育 30
分鐘。
8.  洗滌:操作同 4。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑A 50µl,再加入顯色劑B 50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。  測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
 
計算 計算 計算 計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。  
注意事項 注意事項 注意事項 注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值),請先將樣本
稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑 B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
線形 線形 線形 線形范圍 范圍 范圍 范圍: :: :
7.5IU/L-160IU/L
規(guī)格 規(guī)格 規(guī)格 規(guī)格: :: :
96 人份/盒
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月 
 
 


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