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上海天齊生物科技有限公司


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運(yùn)用新方法來進(jìn)行模板指導(dǎo)的DNA合成

閱讀:498發(fā)布時間:2012-9-11

    當(dāng)一個細(xì)胞發(fā)生分裂時,它通過復(fù)制DNA而傳遞遺傳信息?;瘜W(xué)家們也了解DNA復(fù)制。研究小組描述了一種新的復(fù)制技術(shù):就像細(xì)胞那樣,利用單條DNA鏈作為“主要模板”,但不需要酶。不同于較早期的方法,它允許這條DNA鏈不僅按照大自然偏好的方向,而且按照與當(dāng)前DNA合成技術(shù)相反的方向,進(jìn)行逐步增長。

 

    在一個細(xì)胞內(nèi),DNA雙鏈在復(fù)制過程期間是按照片段進(jìn)行區(qū)分的。其中一條鏈作為主模板發(fā)揮作用。聚合酶逐步地將對應(yīng)的核苷酸接合在一起從而形成新的互補(bǔ)鏈,并且這條互補(bǔ)開始與作為引物的“起始片段”發(fā)生反應(yīng)。DNA鏈的骨架是五元糖環(huán)和磷酸基因交替排列組成的。DNA鏈連接是在五元糖環(huán)的3'和5'氧原子上形成的。而自然增長是在3'方向發(fā)生。

 

    關(guān)于生命起源的一個問題是:在聚合酶存在之前,大自然如何能夠復(fù)制DNA或RNA?自從20世紀(jì)80年代以來,化學(xué)家們利用DNA合成儀產(chǎn)生DNA鏈,但是在沒有模板或引物的條件下,DNA鏈序列是由加入試劑的次序而決定的。只有利用保護(hù)性基團(tuán)抑制不受控制的反應(yīng)和按照程序加入試劑才能確保堿基序列是正確的。這明顯不是大自然合成DNA的方式。但是當(dāng)酶不存在時,模板指導(dǎo)的引物延伸在化學(xué)上是如何發(fā)揮功能的。

 

    zui近,不同的方法被用來開發(fā)一種被稱作化學(xué)引物延伸(chemical primer extension)的技術(shù),這種技術(shù)涉及已激活的核苷酸和一種經(jīng)過稍微修飾的DNA引物的末端發(fā)生反應(yīng)。研究人員發(fā)現(xiàn)保護(hù)性基團(tuán)是在溫和條件下移除的,這樣利用引物和模板制造出類的DNA雙螺旋不會降解。這允許核苷酸(人5核苷酸酶ELISA試劑盒)和引物末端的反應(yīng)能夠依照要求被打開和關(guān)閉,而且模板鏈上的序列信息能夠逐個核苷酸地被讀取。若要這種技術(shù)發(fā)揮作用,模板和引物都被附著到微小球體上。

 

    就像在自動化合成儀中那樣,這些試劑和構(gòu)建元件能夠在球體上流動。引物通過堿基配對與模板結(jié)合。來自周圍溶液中的一個合適的核苷酸??吭谀0迳舷乱粋€空缺的結(jié)合位置上。這個核苷酸隨后通過激活的磷酸單位結(jié)合到引物的活性末端。這些應(yīng)當(dāng)發(fā)生反應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生化學(xué)變化而變得比天然DNA更加活躍。關(guān)于這種技術(shù)的特別事情是能夠在3'或5'方向控制DNA鏈延伸。在自然中,已知這并不發(fā)生。迄今為止,這種過程仍然非常緩慢,而且局限于較短的序列。通過優(yōu)化反應(yīng)調(diào)節(jié)和更好的自動化來進(jìn)行改進(jìn)是可能的。

 

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