中草藥DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 基于PCR的中藥分子鑒定方法是辨別中藥真?zhèn)?,保證藥材質(zhì)量,促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的十分重要的手段。但由于日曬,高溫烘烤等處理極大地破壞了中藥材DNA的完整性;處理過(guò)程中多酚多糖及其氧化物也會(huì)與DNA發(fā)生復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng),所以從中藥材中提取可以用于PCR的DNA比從新鮮植物中提取要困難很多。為解決這一問(wèn)題,天澤基因在植物DNAOUT產(chǎn)品基礎(chǔ)上開發(fā)了本產(chǎn)品。其特點(diǎn)如下:
1. 適合于大多數(shù)藥材。
2. 得到的DNA純凈,OD260/280一般都在1.6以上,原液或100倍之內(nèi)的稀釋液一般都能直接作為PCR模板。
3. 操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過(guò)程只需要三十分鐘左右。
4. 試劑無(wú)毒無(wú)害,環(huán)保衛(wèi)生。
規(guī)格及成分 成 份 20 次包裝 100 次包裝
溶液A 15 mL 75 mL
溶液B 15 mL 75 mL
使用手冊(cè) 1份 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存,有效期一年。
自備試劑 氯仿、異丙醇、75%乙醇
使用方法 1. 65℃預(yù)熱溶液A,待其沉淀溶化后,充分混勻,取0.75 mL加入到10-15mL的塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取20 mg左右的中草藥,先剪成或研磨成微小的碎片,然后轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的溶液A中勻漿,勻漿過(guò)程中將產(chǎn)生大量泡沫,屬于正?,F(xiàn)象。也可以液氮研磨后將中草藥粉末加入到預(yù)熱的溶液A中(建議不要在陶器或玻璃研缽中研磨,因?yàn)槠渲饕煞侄趸钑?huì)非特異地吸附DNA,降低DNA回收量。但可以在塑料研缽中研磨)。
3. 將勻漿液置于65℃水浴保溫5分鐘,然后全部轉(zhuǎn)移到新的1.5mL塑料離心管中(此時(shí)勻漿液較為粘稠,可將槍頭剪去一截后轉(zhuǎn)移上清,植物碎片可倒入)。
4. 12000-15000 g室溫離心3分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的1.5mL塑料離心管中(上清液的體積一般為200-700 µL,如果體積超過(guò)700 µL,多余部分可以不要)。有的上清液中會(huì)有少量細(xì)小塊狀物,但對(duì)后續(xù)操作沒有影響,不必進(jìn)行特殊處理。
5. 在上清液中加入等體積的溶液B,上下顛倒30秒充分混勻(溶液將呈白色混濁狀),然后置冰浴中5分鐘。
6. 12000-15000 g室溫離心3分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新離心管中。
7. 加入0.2 mL的氯仿(自備),震蕩器上充分振蕩30秒混勻。
8. 12000-15000 g室溫離心3分鐘,兩相交界面將有白色膜狀物。小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中。
9. 重復(fù)氯仿抽提步驟一次,此步可以有效去除含色素物質(zhì)。
10. 加入0.6-1倍體積的異丙醇(自備),上下顛倒30秒混勻。
11. 12000-15000 g離心5分鐘,棄上清,管底將有微小DNA沉淀。
12. 沉淀用75%乙醇清洗2次后,室溫晾干。
13. 加入50-100 µL自備緩沖液(如TE)溶解沉淀。DNA即可用于電泳,酶切和PCR等反應(yīng)。如果需要測(cè)OD,則必須乙醇沉淀去除降解的RNA。注意:用本產(chǎn)品提供的RNase處理DNA樣品時(shí),做好按《分子克隆手冊(cè)》等參考書上的方法*去除其中的DNase。