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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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ELISA試劑盒
ATCC細(xì)胞
細(xì)胞
蛋白
生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品
擔(dān)體
中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
IBL試劑盒
*原時(shí)間試劑
血清
肉類及相關(guān)產(chǎn)品 實(shí)驗(yàn)室耗材系列 細(xì)胞系列 抗體純化試劑 單抗、多抗研制用材料 細(xì)胞培養(yǎng)用材料和試劑 免疫分析相關(guān)試劑 免疫分析科研試劑盒 抗體純化試劑盒 抗血清系列 動(dòng)物血漿系列 熱滅活血清系列 碳吸附過(guò)濾血清系列 培養(yǎng)細(xì)菌專用血清系列 動(dòng)物血清系列(pet瓶) HRP標(biāo)記抗原 天然純化抗原 動(dòng)物Ig類抗原 基因重組抗原 膠體金標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化 ) HRP標(biāo)記二抗(抗原親和純化) HRP標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體二抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體一抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體二抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體一抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 裂解血 抗凝動(dòng)物血系列 脫纖維動(dòng)物血系列 無(wú)菌過(guò)濾動(dòng)物血清系列 輻照滅菌動(dòng)物血清系列 無(wú)菌采制動(dòng)物血清系列
科研抗體
PCR試劑盒
科研細(xì)胞
細(xì)胞生物學(xué)試劑

大鼠elisa檢測(cè)試劑盒檢測(cè)中使用的三款必要試劑

時(shí)間:2017/6/6閱讀:317
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大鼠elisa檢測(cè)試劑盒免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上。有些不完整的試盒,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。

固相載體
固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。

ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,大鼠elisa檢測(cè)試劑盒對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。

良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。

與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可剪割,價(jià)廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別,這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。

在ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于反應(yīng)狀態(tài),因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,大鼠elisa檢測(cè)試劑盒使小珠在洗滌過(guò)程中滾動(dòng)淋洗,其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。

 

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