目前常用的幾種大鼠elisa檢測(cè)試劑盒方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過(guò)夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測(cè)樣品(一抗)：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色。
⑩大鼠elisa檢測(cè)試劑盒終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。ELISA試劑盒顏色變黃；用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值，陽(yáng)性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測(cè) 樣品的效價(jià)。
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (1X  帶顏色)    100ML    測(cè)序級(jí)    A.C.E. BUFFER 1X, TINTED
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (1X  帶顏色)    1L    測(cè)序級(jí)    A.C.E. BUFFER 1X, TINTED
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X)    100ML    測(cè)序級(jí)    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X)    1L    測(cè)序級(jí)    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X)    5L    測(cè)序級(jí)    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X  帶顏色)    100ML    測(cè)序級(jí)    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X  帶顏色)    1L    測(cè)序級(jí)    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
    A.C.E. 測(cè)序緩沖液  (10X  帶顏色)    500ML    測(cè)序級(jí)    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
大鼠elisa檢測(cè)試劑盒