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什么是熒光定量PCR?熒光定量PCR的基礎原理。

時間:2011/4/14閱讀:1473
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熒光定量PCR是指在傳統(tǒng)PCR反應體系中加入熒光基團,其熒光基團會與PCR每次循環(huán)產生的新鏈的量成同比例增長,再利用檢測熒光信號的積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種:熒光探針和熒光染料。熒光探針如:TaqMan熒光探針,熒光染料如:SYBR熒光染料。
在熒光定量PCR檢測中經常出現的一些定義值的含義:
Ct值:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環(huán)數。
熒光域值:PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。
Ct值與起始模板的關系:每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標代表起始拷貝數的對數,縱坐標代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

 

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