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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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細(xì)胞
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科研抗體
PCR試劑盒
科研細(xì)胞
細(xì)胞生物學(xué)試劑

什么是熒光定量PCR?熒光定量PCR的基礎(chǔ)原理。

時(shí)間:2011/4/14閱讀:1485
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熒光定量PCR是指在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),其熒光基團(tuán)會(huì)與PCR每次循環(huán)產(chǎn)生的新鏈的量成同比例增長(zhǎng),再利用檢測(cè)熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。熒光探針如:TaqMan熒光探針,熒光染料如:SYBR熒光染料。
在熒光定量PCR檢測(cè)中經(jīng)常出現(xiàn)的一些定義值的含義:
Ct值:每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。
熒光域值:PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光域值的缺省設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。
Ct值與起始模板的關(guān)系:每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù),縱坐標(biāo)代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。

 

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