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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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ELISA試劑盒
ATCC細(xì)胞
細(xì)胞
蛋白
生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品
擔(dān)體
中國藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
IBL試劑盒
*原時間試劑
血清
肉類及相關(guān)產(chǎn)品 實驗室耗材系列 細(xì)胞系列 抗體純化試劑 單抗、多抗研制用材料 細(xì)胞培養(yǎng)用材料和試劑 免疫分析相關(guān)試劑 免疫分析科研試劑盒 抗體純化試劑盒 抗血清系列 動物血漿系列 熱滅活血清系列 碳吸附過濾血清系列 培養(yǎng)細(xì)菌專用血清系列 動物血清系列(pet瓶) HRP標(biāo)記抗原 天然純化抗原 動物Ig類抗原 基因重組抗原 膠體金標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化 ) HRP標(biāo)記二抗(抗原親和純化) HRP標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體二抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體一抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體二抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體一抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 裂解血 抗凝動物血系列 脫纖維動物血系列 無菌過濾動物血清系列 輻照滅菌動物血清系列 無菌采制動物血清系列
科研抗體
PCR試劑盒
科研細(xì)胞
細(xì)胞生物學(xué)試劑

大鼠(Rat)黃體生成素(LH) ELISA 檢測試劑盒

時間:2011/6/23閱讀:575
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大鼠(Rat)黃體生成素(LH) ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本:血清或血漿
 

 
試驗原理
LH試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA.已知LH濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將LH和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中LH的濃度呈比例關(guān)系。
 
試劑盒內(nèi)容及其配制:
試劑盒成份
96孔配置
48孔配置
96/48人份酶標(biāo)板
1塊板(96T
半塊(48T
塑料膜板蓋
1
半塊
標(biāo)準(zhǔn)品:80mIU/ml
1瓶(1.0ml
1瓶(0.5ml
空白對照
1瓶(1.0ml
1瓶(0.5ml
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液
1瓶(8.0ml
1瓶(4.0ml
*標(biāo)記的抗LH抗體
1瓶(8.0ml
1瓶(4.0ml
親和鏈酶素-HRP
1瓶(12ml
1瓶(6.0ml
洗滌緩沖液
1瓶(20ml
1瓶(10ml
底物A
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml
底物B
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml
終止液
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml
 
自備材料:
 
1.   蒸餾水。
2.   加樣器:5ul、10ul50ul、100ul200、500ul、1000ul。
3.   振蕩器及磁力攪拌器等。
4.    
樣品收集、處理及保存方法:
 
1、   血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
 
 
 
2、   血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、   細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、   組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、   保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
操作注意事項:
 
l        試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
l        實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
l        不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
l        使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物AB液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
l        使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
l        底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
l        加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
l        按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 

 
安全性:
 
1.   避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2.   實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
試劑的準(zhǔn)備:
 
1.   標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
80
 mIU/ml
6號標(biāo)準(zhǔn)品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
40
mIU/ml
5號標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20
mIU/ml
4號標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10
mIU/ml
3號標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0
mIU/ml
2號標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5 mIU/ml
1號標(biāo)準(zhǔn)品)
100ul2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 mIU/ml
(空白對照)
原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
 
2.   洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
 
試劑盒性能:
 
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
 
 
 
操作步驟:
 
1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7.   每孔加入底物A、B50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.   取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.   450nm波長處測定各孔的OD值。
 
結(jié) 果 判 斷 析:
 
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的LH標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的LH含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍:0-80mIU/ml
4、敏感度: 0.1 mIU/ml
 

 

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