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ELISA試劑盒
ATCC細胞
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肉類及相關產(chǎn)品 實驗室耗材系列 細胞系列 抗體純化試劑 單抗、多抗研制用材料 細胞培養(yǎng)用材料和試劑 免疫分析相關試劑 免疫分析科研試劑盒 抗體純化試劑盒 抗血清系列 動物血漿系列 熱滅活血清系列 碳吸附過濾血清系列 培養(yǎng)細菌專用血清系列 動物血清系列(pet瓶) HRP標記抗原 天然純化抗原 動物Ig類抗原 基因重組抗原 膠體金標記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化 ) HRP標記二抗(抗原親和純化) HRP標記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體二抗/PcAb(未標注的為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體一抗/PcAb(未標注的為G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體二抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體一抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 裂解血 抗凝動物血系列 脫纖維動物血系列 無菌過濾動物血清系列 輻照滅菌動物血清系列 無菌采制動物血清系列
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PCR試劑盒
科研細胞
細胞生物學試劑

小鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒操作步驟說明

時間:2011/10/20閱讀:515
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1、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?100 ,余孔分別加標準品或待測樣品100,注意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標板加上覆膜,37 溫育1小時。
3、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。
5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、每孔加底物溶液90 ,酶標板加上覆膜37避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。
7、每孔加終止溶液50 ,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物 液的加入順序相同。
8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度( 值)。
注意事項:
1、試劑準備:所有試劑在使用前應平衡至室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2、加樣:加樣或加試劑時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設置復孔進行實驗。
3、溫育:為防止樣品蒸發(fā),實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4、洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5、試劑配制:Detection A及DetectionB在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配制使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請配制標準品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10),以避免由于不準確稀 釋而造成濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。
6、反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7、底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。

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