雞巨噬細胞炎癥蛋白-1(MIP-1)ELISA試劑盒檢測

實驗原理：

雞巨噬細胞炎癥蛋白MIP-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知MIP-1濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將MIP-1和*標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MIP-1的濃度呈比例關(guān)系。

操作步驟： 

1.雞巨噬細胞炎癥蛋白MIP-1使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5.雞巨噬細胞炎癥蛋白MIP-1每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

雞巨噬細胞炎癥蛋白MIP-1操作注意事項：

●試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。

●實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

●不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

●使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

●使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

●雞巨噬細胞炎癥蛋白MIP-1底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

●加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

●按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。