目前，胸膜肺炎放線桿菌比較難以分離，其原因有待進(jìn)一步研究。本研究分離出6株APP地方分離株，人ELISA試劑盒對(duì)我國(guó)豬傳染性胸膜肺炎的病原學(xué)與流行病學(xué)研究積累了一定的菌株資源。同時(shí)，對(duì)ApxⅡ-ELISA和ApxⅣ-ELISA兩種抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了產(chǎn)業(yè)化研究，其中ApxⅣ-ELISA達(dá)到臨床應(yīng)用水平，對(duì)豬傳染性胸膜肺炎的診斷與防控具有十分重要的意義。
胸膜肺炎放線桿菌是引起豬傳染性胸膜肺炎的病原，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前共有15個(gè)血清型，該病原菌的主要毒力因子包括CPS、LPS、OMP、TBP、粘附因子、內(nèi)毒素、尿素酶等。Apx毒素是APPzui主要的毒力因子，現(xiàn)證明不同血清型的菌株可產(chǎn)生4種Apx，ApxⅡ除血清型10和14以外，其它血清型都分泌；任何血清型都能在體內(nèi)分泌毒素蛋白ApxⅣ，但體外培養(yǎng)的細(xì)菌卻不能分泌該毒素。
本研究包括如下三方面的內(nèi)容：
1．胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定 將病料接種培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)24小時(shí)的培養(yǎng)后將細(xì)菌進(jìn)行純化，挑單菌落革蘭氏染色、鏡檢，將細(xì)菌接種到細(xì)菌鑒定微量反應(yīng)管，同時(shí)以細(xì)菌制備模板，做apxⅣ-PCR，然后經(jīng)過(guò)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)確定血清型。結(jié)果從患病豬的肺、關(guān)節(jié)分離到胸膜肺炎放線桿菌6株，其中，4株4型，1株3型，1株未定型。
2．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅡ-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制及其應(yīng)用 根據(jù)ApxⅡ的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了一種能夠監(jiān)測(cè)疫苗免疫后的抗體水平和對(duì)疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)估的血清學(xué)方法ApxⅡ-ELISA；本研究將該診斷方法進(jìn)一步研制成試劑盒，對(duì)其特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)試，與間接血凝試驗(yàn)試劑盒進(jìn)行了對(duì)比研究，并用該試劑盒檢測(cè)了來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國(guó)的臨床豬血清1453份，同時(shí)也制作了ApxⅡ的抗體削長(zhǎng)規(guī)律曲線 結(jié)果表明ApxⅡ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復(fù)性良好（變異系數(shù)均＜15％）；人ELISA試劑盒試劑盒在2～8℃保存9個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性良好；檢測(cè)來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國(guó)的臨床豬血清的陽(yáng)性率分別為49.56％、85.51％、1.92％、73.33％、1.85％和100％。從ApxⅡ抗體消長(zhǎng)規(guī)律的曲線可以看出，疫苗免疫后3周或者4周就可以監(jiān)測(cè)到ApxⅡ抗體，抗體水平達(dá)到峰值時(shí)，其值為1∶1280。ApxⅡ-ELISA試劑盒能夠有效的診斷豬傳染性胸膜肺炎，同時(shí)也可作為一種評(píng)價(jià)豬群免疫后免疫效果的有效方法；
3．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣ-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制及其應(yīng)用 根據(jù)ApxⅣ的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了一種能夠特異性的診斷豬傳染性胸膜肺炎，并且能夠有效的區(qū)分感染豬與免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。本研究將該診斷方法進(jìn)一步研制成試劑盒，對(duì)其特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)試，與間接血凝試驗(yàn)及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進(jìn)行了對(duì)比研究，并用該試劑盒檢測(cè)了來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國(guó)的臨床豬血清1453份，同時(shí)也制作了ApxⅣ的抗體削長(zhǎng)規(guī)律曲線。人ELISA試劑盒 結(jié)果表明ApxⅣ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性，與CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測(cè)符合率為91.37％；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復(fù)性良好（變異系數(shù)均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性良好；App感染后3周或者4周就可以監(jiān)測(cè)到ApxⅣ抗體，抗體水平達(dá)到峰值時(shí)，其值為1∶640。檢測(cè)來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國(guó)的臨床豬血清的陽(yáng)性率分別為22.30％、39.72％、0.64％、42.22％、1.85％和93.94％。ApxⅣ-ELISA試劑盒能夠有效區(qū)分APP感染豬與三價(jià)滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬。
