實驗目的：

本試劑盒用于測定血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中誘導型一氧化氮合成酶Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原的含量。

商品屬性：

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原。用純化的Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原，再與 HRP 標記的Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原抗體結合，形成抗體抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原濃度。

檢測原理：

1. 抗原-抗體反應

ELISA的基礎是抗原-抗體反應?？乖且环N能夠與抗體結合的物質，而抗體則是免疫系統產生的蛋白質，能夠識別并結合抗原。抗原-抗體結合是高度特異的，因此ELISA能夠準確地檢測樣本中的抗原或抗體。

2. 酶聯免疫吸附試驗

Col Ⅳ 小鼠Ⅳ型膠原elisa試劑盒在ELISA中，抗原或抗體被吸附在固相載體表面。常用的固相載體包括聚苯乙烯、尼龍等。載體表面經過特殊處理，可以增強其與抗原或抗體的結合能力。將酶標記的二抗加入反應體系中，二抗能夠與抗原或抗體結合，形成酶標抗原-抗體復合物。

3. 底物顯色反應

在加入底物后，酶標抗原-抗體復合物與底物發(fā)生顯色反應，產生顏色變化。底物可以是顯色劑，也可以是熒光染料。顯色反應的強度與抗原-抗體復合物的量成正比，因此可以通過測量光密度值來定量分析樣本中的抗原或抗體。

4. 終止反應

顯色反應持續(xù)一定時間后，需要加入終止液終止反應。終止液可以使酶失活，停止顯色反應。終止液一般是酸或堿溶液。

5. 檢測與分析

終止反應后，將固相載體放入多功能酶標儀中測量各孔的光密度值。通過標準曲線可以得出樣本中抗原或抗體的濃度。標準曲線是通過檢測已知濃度的標準品繪制而成的。
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注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。